2015年执业西药师考点讲解:酶液的浓缩
提取的酶液为减少纯化操作容积,通常先进行浓缩。工业上可用真空减压浓缩、薄膜浓缩、冷冻浓缩和逆向渗透作用进行浓缩。对于少量酶液下述方法浓缩更合适:
用葡聚糖凝胶(分子筛)浓缩:取相当于酶液量1/5的干葡聚糖凝胶G15或G25,分次加入酶液中,搅拌30min,使凝胶吸水膨胀,进行吸滤。经重复数次操作即可在短时间内把酶液浓缩至所需的体积。也可将酶液装于透析袋内,埋入干凝胶中,袋内酶液也可得到浓缩。
用聚乙二醇浓缩:将稀酶液装入透析袋内,袋外复以聚乙二醇,袋内水份被袋外的聚乙二醇所吸收,在短时间内可以达到浓缩的目的,得到所需的浓酶液。
用超滤法浓缩:超滤技术在其可筛分范围内分离酶分子时不发生“相态”变化,可以避免酶蛋白变性,且分离度快,所以愈来愈被广泛采用。各种不同孔径的超滤膜,适用于实验室规模及一定工业规模的酶液浓缩。如国产二醋酸纤维素制成10~200埃孔径的超滤膜,用于实验室规模固氮酶液的脱盐和浓缩,效果良好。
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