三、显色反应
1.甾体母核的显色反应
(1)醋酐-浓硫酸反应(Liebermann-Burchard反应)
产生红→紫→蓝→绿→污绿等颜色变化,最后褪色。
(2)氯仿-浓硫酸反应
硫酸层显血红色或蓝色,氯仿层显绿色荧光。
(3)三氯化
锑反应
反应液呈现紫红→蓝→绿的变化。
(4)三氯乙酸-氯胺T反应
样品点于滤纸或薄层板,喷以三氯乙酸-氯胺T试剂,100℃加热,紫外灯下观察荧光。
可用于区分三种洋地黄毒苷元(洋地黄毒苷元、羟基洋地黄毒苷元和异羟基洋地黄毒苷元)。洋地黄毒苷元衍生的苷类显黄色荧光;羟基洋地黄毒苷元衍生的苷类显亮蓝色荧光;异羟基洋地黄毒苷元衍生的苷类显蓝色荧光。
2.C-17位不饱和内酯环的颜色反应
甲型强心苷在碱性醇溶液中,能与下列活性亚甲基试剂作用而呈深红色。乙型强心苷无此类反应。
(1)Legal反应:试剂为亚硝酰铁氰化钠和氢氧化钠醇溶液。
(2)Raymond反应:试剂为间二硝基苯和氢氧化钠醇溶液。
(3)Kedde反应:试剂为3,5-二硝基苯甲酸和氢氧化钠醇溶液。
(4)Baljet反应:试剂为苦味酸和氢氧化钠醇溶液。
3.α-去氧糖的颜色反应
(1)Keller-Kiliani(K-K)反应
试剂包括冰醋酸、浓硫酸和三氯化铁。若在此条件下,能水解出游离的α-去氧糖,醋酸层渐呈蓝色。需要注意的是,这一反应是α-去氧糖的特征反应,但只对游离的α-去氧糖或α-去氧糖与苷元连接的强心苷呈色。α-去氧糖和葡萄糖或其他羟基糖连接的双糖、叁糖及乙酰化的α-去氧糖,由于在此条件下不能水解出的游离的α-去氧糖而不呈色。
(2)吨氢醇反应
只要分子中有α-去氧糖即可呈红色。试剂包括冰醋酸、浓盐酸和吨氢醇。
(3)过碘酸-对硝基苯胺反应
(4)对-二甲氨基苯甲醛反应
四、水解反应
1.酸水解
(1)温和酸水解
用稀酸(如0.2~0.5mol/L的盐酸或硫酸)在含水醇中短时间(半小时至数小时)加热回流,Ⅰ型强心苷水解生成苷元和糖。紫花洋地黄苷A温和酸水解得到洋地黄毒苷元、2分子D-洋地黄毒糖和1分子洋地黄双糖。
(2)强烈酸水解
Ⅱ型和Ⅲ型强心苷用温和酸水解无法使其水解,必须增高酸浓度(3~5%),延长水解时间或加压。但常引起苷元结构的改变,形成
脱水苷元。
(3)氯化氢-丙酮法
2.酶水解
酶能水解除去强心苷分子中的葡萄糖而保留α-去氧糖,得到次生苷。紫花洋地黄苷A、B分别经紫花苷酶水解除去D-葡萄糖而生成洋地黄毒苷和羟基洋地黄毒苷医学全.在.线.提供.
www.lindalemus.com。当强心苷的糖部分有乙酰基存在的时候,酶水解的的活性会相应的降低。当苷元相同的时候,一般乙型强心苷比甲型强心苷更容易被酶水解。酶水解在强心苷的生产中具有重要的作用。强心苷的强心作用:单糖苷〉二糖苷〉三糖苷。
3.碱水解
在碱作用下,强心苷可发生酰基水解,内酯环裂解,双键移位,苷元异构化等。
第三节 提取分离与结构鉴定
一、强心苷的提取分离
(一)提取
提取原生苷,首先要注意抑制酶的活性,防止酶解,提取时避免酸碱的影响。提取次生苷,可利用酶解或酸水解的方法,提高目标提取物的产量。
常用甲醇或70~80%的乙醇作溶剂。原料含脂类杂质较多时,可先用石油醚或溶剂汽油脱脂;原料含叶绿素较多时,可用稀碱液皂化法,静置析胶法,活性炭吸附法除去叶绿素。
(二)分离
强心苷浓缩液,可用氯仿和不同比例的氯仿-甲醇(乙醇)溶液依次萃取,将强心苷按极性大小分为几部分,再采用溶剂萃取法、逆流分溶法和色谱分离法分离。分离亲脂性单糖苷、次苷和苷元,一般选用吸附色谱,常以硅胶和氧化铝为吸附剂。
二、强心苷的紫外光谱特征
甲型强心苷元在217~220nm处呈现最大吸收,乙型强心苷元在295~300nm处呈现最大吸收。
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