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您现在的位置: 医学全在线 > 药学理论 > 药物分析方法 > 正文:门冬酰胺酶原料药—效价测定—分光光度法
    

门冬酰胺酶原料药—效价测定—分光光度法

医药数据库中心 药学论坛 门冬酰胺酶原料药—效价测定—分光光度法
方法名称:
门冬酰胺酶原料药—效价测定—分光光度法
应用范围:

本方法采用分光光度法测定门冬酰胺酶原料药中门冬酰胺酶的效价。

本方法适用于门冬酰胺酶原料药。

方法原理:

供试品经前处理后,置紫外可见分光光度计,于450nm波长处测定吸收度,计算出其效价。

试剂:

1. 磷酸盐缓冲液

2. 门冬酰胺

3. 25%三氯醋酸溶液

4. 碘化汞钾溶液

仪器设备:

紫外可见分光光度计

试样制备:

1. 磷酸盐缓冲液

取0.1mol/L磷酸氢二钠溶液适量,用0.1mol/L磷酸二氢钠溶液调节pH值至8.0。

2.碘化汞钾溶液

取碘化汞23g、碘化钾16g,加水至100mL,临用前以20%氢氧化钠溶液等体积混合。

3.对照品溶液的制备

取经105℃干燥至恒重的硫酸铵适量,精密称定,用水制成0.0015mol/L的溶液。

4. 供试品溶液的制备

精密称取供试品约0.1g,用磷酸盐缓冲液制成每1mL中含门冬酰胺酶约5单位的溶液,即得供试品溶液。

注:“精密称取”系指称取重量应准确至称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

操作步骤:

取试管3支(14cm×1.2cm),各加入用上述磷酸盐缓冲液配制的0.33%门冬酰胺溶液1.9mL,于预热3分钟,分别于第一管(t0)中加入25%三氯醋酸溶液0.5mL,第2、3管(t)中各精密加入供试品溶液0.1mL,置37℃水浴中,准备反应15分钟,立即于第一管(t0)中精密加入供试品溶液0.1mL,第2、3管(t)中各加入25%三氯醋酸溶液0.5mL,摇匀,分别作为空白反应液(t0)和反应液()。精密量取t0、t和对照品溶液各0.5mL置试管中,各加水7.0mL及碘化汞钾溶液1.0mL,混匀,另取试管一支,加水7.5mL及碘化汞钾溶液1.0mL作为空白对照管,室温放置15分钟,照紫外分光光度法,于波长450nm处测定吸收度A0、At和As,以At的平均值计算。

注:分光光度法应以配制供试品的同批溶剂为对照,采用1cm的石英吸收池。以吸收度最大的波长作为测定波长,一般供试品的吸收度读数,以在0.3-0.7之间的误差较小。仪器的狭缝波带宽度应小于供试品吸收带的半宽度,否则测得的吸收度偏低。狭缝宽度的选择,应以减少狭缝宽度时供试品的吸收度不再增加为准。由于吸收池和溶剂本身可能有空白吸收,因此测定供试品的吸收度后应减去空白读数,再计算含量。

参考文献:

中华人民共和国药典,国家药典委员会编,化学工业出版社,2005年版,一部,p.3。

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