丝裂霉素原料药－丝裂霉素－高效液相色谱法

本方法采用高效液相色谱法测定丝裂霉素原料药中丝裂霉素的含量。

供试品经N，N-二甲基乙酰胺溶解并定量稀释，进入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长365nm处检测丝裂霉素的峰面积，计算出其含量。

1.乙腈

2.醋酸铵缓冲液

3. 盐酸溶液（0.01mol/L)

1.仪器

1.1 高效液相色谱仪

1.2 色谱柱

苯基硅烷键合硅胶为填充剂

1.3 紫外吸收检测器

2.色谱条件

2.1 流动相：醋酸铵缓冲液 甲醇=75 25

2.2 检测波长：365nm

2.3 柱温：室温

1.酸铵缓冲液

取醋酸铵2.05g，加适量水使溶解，再加0.83mol/L醋酸溶液6.7mL，加水稀释成1000mL。

2.盐酸溶液（0.01mol/L)

取盐酸0.9mL，加水适量使成1000mL，摇匀。

3.对照品溶液的制备

精密称取丝裂霉素对照品适量，加N，N-二甲基乙酰胺溶解并定量稀释成每1mL中约含丝裂霉素0.2mg的溶液，即为对照品溶液。

4.试品溶液的制备

精密称取供试品适量，加N，N-二甲基乙酰胺溶解并定量稀释成每1mL中约含丝裂霉素0.2mg的溶液，即为供试品溶液。

注：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5mL，注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器于波长365nm处测定丝裂霉素（C₁₅H₁₈N₄O₅)的峰面积，计算出其含量。