苯甲酸雌二醇原料药－苯甲酸雌二醇－高效液相色谱法

本方法采用高效液相色谱法测定苯甲酸雌二醇原料药中苯甲酸雌二醇的含量。

本方法适用于苯甲酸雌二醇原料药。

供试品经甲醇溶解并定量稀释，加入内标后再经甲醇定量稀释，进入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长230nm处检测苯甲酸雌二醇的峰面积，计算出其含量。

1. 甲醇

2. 丙酸睾酮

1. 仪器

1.1 高效液相色谱仪

1.2 色谱柱

十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，理论塔板数按苯甲酸雌二醇峰计算应不低于4500。

1.3 紫外吸收检测器

2. 色谱条件

2.1 流动相：甲醇 水=80 20

2.2 检测波长：230nm

2.3 柱温：室温

1. 内标溶液的制备

精密称取丙酸睾酮约48mg，置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即为内标溶液。

2. 对照品溶液的制备

精密称取苯甲酸雌二醇对照品25mg，置25mL量瓶中，加甲醇微温使溶解，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取该溶液与内标溶液各5mL，置25mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即为对照品溶液。

3. 供试品溶液的制备

精密称取供试品25mg，置25mL量瓶中，加甲醇微温使溶解，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取该溶液与内标溶液各5mL，置25mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即为供试品溶液。

注：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10mL，注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器于波长230nm处测定苯甲酸雌二醇（C₂₅H₂₈O₃)的峰面积，计算出其含量。

中华人民共和国药典，国家药典委员会编，化学工业出版社，2005版，二部，p.319。