玻璃酸酶的测定—玻璃酸酶测定法

本方法采用玻璃酸酶测定法测定玻璃酸酶的效价。

本方法适用于玻璃酸酶。

精密称取本品适量，加冷的水解明胶稀释剂制成每1mL中约含1.5个单位的溶液，照玻璃酸酶测定法，测定玻璃酸酶的效价。

1. 醋酸-醋酸钾缓冲液

2. 磷酸盐缓冲液

3.水解明胶

4. 水解明胶稀释剂

5. 血清贮备液

6. 血清溶液

7. 玻璃酸钾贮备液

8. 玻璃酸钾溶液

1. 醋酸-醋酸钾缓冲液

取醋酸钾14g与冰醋酸20.5mL，加水使成1000mL。

2. 磷酸盐缓冲液

取磷酸二氢钠2.5g、无水磷酸氢二钠1.0g与氯化纳8.2g，加水使成1000mL。

3.水解明胶

取明胶50g，加水1000mL，在121℃加热90分钟，然后冷冻干燥。

4. 水解明胶稀释剂

取磷酸盐缓冲液与水各250mL，加水解明胶330mg摇匀，在0-4℃保存。如溶液不发生混浊，可继续使用。

5. 血清贮备液

取新鲜牛血清或冻干牛血清（先用水溶解并稀释至标示量体积)1份，加醋酸-醋酸钾缓冲液9份稀释，再以4mol/L盐酸溶液调节pH值至3.1，放置18-24小时后再用。在0-4℃保存，应可用30日。

6. 血清溶液

血清贮备液中血清总固体（取牛血清适量，置装有洁净沙粒并在105℃干燥至恒重)在8%左右着，取1份，用醋酸-醋酸钾缓冲液3份；血清总固体在5%左右着，取一份，用醋酸-醋酸钾缓冲液2份稀释。临用时配制。

7. 玻璃酸钾贮备液

取预先经五氧化二磷减压干燥48小时的玻璃酸钾，加水制成每1mL中含0.5mg的溶液。在0℃以下保存，可应用30日。

8. 玻璃酸钾溶液

取玻璃酸钾贮备液一份，用磷酸盐缓冲液1份稀释。临用时配制。

9. 供试品溶液的制备

按估计单位精密称取本品适量，加冷的水解明胶稀释制成每1mL中约含1.5个单位的溶液，作为供试品溶液。临用时配制。

10. 对照品溶液的制备

精密称取玻璃酸酶对照品适量，加冷的水解明胶稀释制成每1mL中约含1.5个单位的溶液，作为对照品溶液。临用时配制。

注：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

1.供试品的测定

取大小相同的试管6支，依次加供试品溶液0.20mL，0.30mL，0.40mL，各2支；再依次相应加入水解明胶稀释液0.30mL，0.20mL，0.10mL，每隔30秒钟顺序加入玻璃酸钾溶液0.50mL，使每管的总体积为1.00mL，摇匀，置37℃±0.5℃水浴中；每管准确保温30分钟后，每隔30秒顺序取出，立即顺序加入血清溶液4.0mL，摇匀，在室温放置 30分钟，摇匀，在640nm的波长处测定吸光度，同时以磷酸盐缓冲液0.50mL代替玻璃酸钾溶液，加水解明胶稀释液0.50mL，摇匀，按上述方法自“置37℃±0.5℃水浴中”起同法操作，作为空白，计算，即得。