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重组人胰岛素的测定—效价测定

医药数据库中心 药学论坛 重组人胰岛素的测定—效价测定
方法名称:
重组人胰岛素的测定—效价测定
应用范围:

本方法采用高效液相色谱法测定重组人胰岛素的含量。

本方法适用于重组人胰岛素。

方法原理:

供试品制成盐酸溶液,进入高效液相色谱仪进行色谱分离,用紫外吸收检测器,于波长214nm处检测重组人胰岛素的吸收值,计算出其含量。

试剂:

1. 异丙醇

2. 0.2mol/L硫酸盐缓冲液

3. 0.01mol/L盐酸溶液

仪器设备:

1. 仪器

1.1 高效液相色谱仪

1.2 色谱柱

十八烷基硅烷健合硅胶为填充剂(5-10μm)。

1.3 紫外吸收检测器

2. 色谱条件

2.1 流动相:乙腈+硫酸盐缓冲液=26+74

2.2 检测波长:214nm

2.3 柱温:室温

试样制备:

1. 0.2mol/L硫酸盐缓冲液

无水硫酸钠28.4g,加水溶解后,加磷酸2.7mL、水800mL,用乙醇胺调节pH值至2.3,加水至1000mL。

2. 称取供试品

精密称取本品适量。

3. 对照品溶液的制备

精密称取重组人胰岛素对照品适量,用0.01mol/L盐酸溶液制成每1mL含1.0mg的溶液,并室温放置至少24小时。

4. 供试品溶液的制备

供试品加0.01mol/L盐酸溶液定量稀释成每1mL含10单位的溶液(临用新配),混匀,作为供试品溶液。

注:“精密称取”系指称取重量应准确至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

操作步骤:

分别精密吸取上述对照品溶液和供试品溶液20μL 注入高效液相色谱仪,用紫外吸收检测器,于波长214nm处测定重组人胰岛素的吸收值,计算出其含量。

参考文献:

中华人民共和国药典,国家药典委员会编,化学工业出版社,2005年版,二部,p.415。

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