黄体酮注射—液黄体酮的测定—高效液相色谱法

本方法采用高效液相色谱法测定黄体酮注射液中黄体酮的含量。

本方法适用黄体酮注射液。

供试品和内标均制成甲醇溶液，进入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长254nm处检测黄体酮（C₂₁H₃₀O₂)和内标己烯雌酚的吸收值，计算出其含量。

1. 甲醇

2. 乙醚

1. 仪器

1.1 高效液相色谱仪

1.2 色谱柱

十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，理论板数按黄体酮峰计算应不低于 1000，黄体酮峰与内标物质峰的分离度应符合要求。

1.3 紫外吸收检测器

2. 色谱条件

2.1 流动相：甲醇＋水= 65 35

2.2 检测波长：254nm

2.3 柱温：室温

1. 量取供试品

用内容量移液管精密量取本品适量（约相当于黄体酮50mg)，置50mL量瓶中。

2. 对照品溶液的制备

精密称取黄体酮对照品适量，加甲醇溶解并稀释成溶液。

3. 内标溶液的制备

取己烯雌酚25mg，置25mL量瓶中，加稀甲醇溶解并稀释至刻度，即得。

4. 供试品溶液的制备

上述供试品用乙醚分数次洗涤移液管内壁，洗液并入量瓶中，加乙醚稀释至刻度，摇匀；精密量取5mL置具塞离心管中，在温水浴内使乙醚挥散；用甲醇振摇提取4次（第1~3次各5mL，第4次3mL)，每次振摇10分钟后，离心15分钟，并用滴管将甲醇移置25mL量瓶中，合并提取液，精密加内标溶液5mL，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

注：“精密称取”系指称取重量应准确至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

分别精密吸取上述供试品溶液和对照品溶液5μL 注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器，于波长254nm处测定黄体酮和内标己烯雌酚的吸收值，按内标法以峰面积计算，即得。

中华人民共和国药典，国家药典委员会编，化学工业出版社，2005年版，二部，p643。