维生素AD滴剂—维生素A—维生素A测定法

本方法采用维生素A测定法测定维生素AD滴剂中维生素A的含量。

本方法适用于维生素AD滴剂。

本法是用分光光度法测定维生素A在特定波长处的吸光度来计算其含量，以单位表示，每单位相当于全反式维生素A醋酸酯0.344µg或全反式维生素A醇0.300µg。

1.环己烷

2. 乙醚（不含过氧化物)

3. 无水硫酸钠

4.甘油淀粉润滑剂

1.甘油淀粉润滑剂

取甘油22g，加入可溶性淀粉9g，加热至140℃，保持30分钟并不断搅拌，放冷，即得。

取装量差异项下内容物，本法是用分光光度法测定维生素A在特定波长处的吸光度来计算其含量，以单位表示，每单位相当于全反式维生素A醋酸酯0.344µg或全反式维生素A醇0.300µg。

第一法：取供试品适量，精密称定，加环己烷溶解并定量稀释制成每1mL中含有9-15单位的溶液，照紫外-可见分光光度法，测定其吸收峰的波长，并在下表所列各波长处测定吸光度，计算各吸收度与波长328nm处吸光度的比值和波长328nm处的E1m值。

如果吸收峰波长在326-329nm之间。且所测得各波长吸光度比值不超过表中规定的±0.02，可用下式计算含量：每1g供试品中含有维生素A的单位= E1m（328nm)×1900

如果吸收峰波长在326-329nm之间，但所测得的各波长吸光度比值超过表中规定的±0.02，应按下式求出校正后的吸光度，然后再计算含量：A₃₂₈(校正)=3.52（2 A₃₂₈- A₃₁₆- A₃₄₀)

如果在328nm处的校正吸光度与未校正的吸光度相差不超过±3.0%，则不用校正吸光度，仍以未经校正的吸光度计算含量。

如果校正吸光度与未校正吸光度相差在-15%至-3%之间，则以校正吸光度计算含量。

如果校正吸光度超出未校正吸光度相差在-15%至-3%范围，或者吸收峰波长不在326nm~329nm之间，则供试品须按下述第二法测定。

第二法 精密称取供试品适量（约相当于维生素A总量500单位以上，重量不多于2g)，置皂化瓶，加乙醇30mL与50%（g/g)氢氧化钾溶液3mL，置水浴中煮沸回流30分钟，冷却后，自冷凝顶端加水10mL冲洗冷凝管内部管壁，将皂化液移至分液漏斗中（分液漏斗活塞涂以甘油淀粉润滑剂)，皂化瓶用水60~100mL分数次洗涤，洗液并入分液漏斗中，用不含过氧化物的乙醚振瑶提取4次，每次振摇约5分钟，第一次60mL，以后各次40mL，合并乙醚液，用水洗涤数次，每次约100mL，洗涤应缓缓旋动，避免乳化，直至水层遇酚酞指示液不再显红色，乙醚液用铺有脱脂棉与无水硫酸钠的滤器滤过，滤器用乙醚稀释至刻度，摇匀；精密称取适量，置蒸发皿内，水浴上低温蒸发至5mL后，置减压干燥器中，抽干，迅速加异丙醇溶解并定量稀释制成每1mL中含维生素A9~15单位，照紫外-可见分光光度法，在300nm、310nm、325nm与334nm四个波长处测定吸光度，并测定吸收峰的波长。吸收峰的波长应在323nm~327nm之间，且300nm波长处的吸光度与325nm波长处的吸光度的比值应不超过0.73，按下式计算校正吸光度：

A₃₂₅（校正)=6.815A₃₂₅ –2.555A₃₂₅ –4.260A₃₂₅ 每1g供试品中含有维生素A的单位=E（325nm,校正)*1830。

如果校正吸光度在未校正吸光度的（100±3)%以内，则仍以未经校正的吸光度计算含量。

如果吸收峰的波长不在323~327nm之间，或300nm波长处的吸光度与325nm波长处的吸光度的比值超过0.73，则应自上述皂化后的乙醚提取液250mL中，另精密量取适量（相当于维生素A300~400单位)，减压蒸去乙醚至约剩5mL，在氮气流下吹干，立即精密加入甲醇3mL，溶解后，精密量取500uL，注入维生素D测定法第二法项下的净化系统用色谱柱系统，准确收集含有维生素A的流出液，，在氮气流下吹干，而后照上述方法自“迅速加异丙醇溶解”起，依法操作并计算含量。

附注：（1)甘油淀粉润滑剂 取甘油22g，加入可溶性淀粉9g，加热至140℃，保持30分钟并不断搅拌，放冷，即得。

（2)不含过氧化物的乙醚 照麻醉乙醚项下的过氧化物检查，如不符合规定，可用5%硫代硫酸钠溶液振摇，静置，分取乙醚层，再用水振摇洗涤1次，重蒸，弃去首尾5%部分，馏出的乙醚再检查过氧化物，应符合规定。

注1：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一,“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

中华人民共和国药典，国家药典委员会编，化学工业出版社，2005年版，二部，p.664。