腺苷钴胺—腺苷钴胺的测定—分光光度法

本方法采用分光光度法测定腺苷钴胺（C₇₂H₁₀₀CoN₁₈O₁₇P)的含量。

本方法适用于腺苷钴胺的测定。

取本品适量，加水制成每1mL中约含0.5mg的溶液。量取此溶液两份，分别用氯化钾溶液和磷酸缓冲溶液（pH7.0)为稀释剂稀释至刻度，照紫外-可见分光光度法，以各自的稀释剂为空白，采用以氯化钾溶液制得的稀释液，在304.5nm波长附近（每间隔0.2nm)找出最大吸收波长，分别测定吸收度，计算吸收度差值，按C₇₂H₁₀₀CoN₁₈O₁₇P的吸收系数（△E1m)为58.0计算，即得。

1. 蒸馏水

2. 氯化钾溶液

3. 磷酸缓冲溶液（pH7.0)

1. 氯化钾溶液

取0.2mol/L氯化钾溶液250mL与0.2mol/L盐酸溶液53mL，加水稀释至1000mL。

2. 磷酸缓冲溶液（pH7.0)

取磷酸二氢钾0.68g，加0.1mol/L氢氧化钠溶液29.1mL，用水稀释至100mL，即得。

3. 供试品溶液的制备

取本品，精密称定，加水制成每1mL中约含0.5mg的溶液。精密量取此溶液各5mL，置两个50mL量瓶中，分别用氯化钾溶液和磷酸缓冲溶液（pH7.0)为稀释剂稀释至刻度，作为稀释液。

注：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

注：“水分测定”用烘干法。取供试品2-5g，平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚度不超过5mm，疏松样品不超过10mm，精密称定，打开瓶盖在100-105℃干燥5小时，将瓶盖盖好，移至干燥器中，冷却30分钟，精密称定重量，再在上述温度干燥1小时，冷却，称重，至连续两次称重的差异不超过5mg为止。根据减失的重量，计算供试品中含有水分的百分数。

供试品的测定

照紫外-可见分光光度法，以各自的稀释剂为空白，采用以氯化钾溶液制得的稀释液，在304.5nm波长附近（每间隔0.2nm)找出最大吸收波长，分别测定吸收度，计算吸收度差值，按C₇₂H₁₀₀CoN₁₈O₁₇P的吸收系数（E1m)为58.0计算，即得。