糜蛋白酶—糜蛋白酶的测定—酶效价测定法

本方法采用酶效价测定法测定糜蛋白酶的效价。

本法系测定糜蛋白酶对底物降解的速率，以测定供试品的效价。

1. N-乙酰－L－酪氨酸乙酯

2. 磷酸盐缓冲液

3. 0.0012mol/L盐酸溶液

紫外－可见分光光度计

1.磷酸盐缓冲液

取0.067mol/L磷酸二氢钾溶液38.9mL与0.067mol/L磷酸氢二钠溶液61.1mL，混合，pH值7.0。

2.底物溶液的制备

取N-乙酰－L－酪氨酸乙酯23.7mg，置100mL量瓶中，加磷酸盐缓冲液50mL，温热使溶解，冷却后再稀释至刻度，摇匀。冰冻保存，但不得反复冻融。

3. 供试品溶液的制备

精密称取本品适量，用0.0012mol/L盐酸溶液制成每1mL中含12～16糜蛋白酶的溶液

注：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

取0.0012mol/L盐酸溶液0.2mL与底物溶液3.0mL，照紫外－可见分光光度法，在25±0.5°C，于237nm的波长处测定并调节吸光度为0.200。再取供试品溶液0.2mL与底物溶液3mL，立即计时并摇匀，每隔30秒读取吸光度，共5分钟（重复一次)，吸光度的变化率应恒定，恒定时间不少于3分钟。若变化率不能保持恒定，可用较低浓度另行测定，每30秒的吸光度变化率应控制再0.008～0.012，以吸光度为纵坐标，时间为横坐标，作图，取在3分钟那呈直线的部分，计算。

中华人民共和国药典，国家药典委员会编，化学工业出版社，2005年版，二部，p.887。