方法名称： |
注射用双黄连（冻干)—连翘苷的测定—高效液相色谱法 |
应用范围： |
本方法采用高效液相色谱法测定注射用双黄连（冻干)中连翘苷的含量。 本方法适用于中药制剂注射用双黄连（冻干)。 |
方法原理： |
供试品于分液漏斗中，加水溶解，以氯仿提取，收集氯仿液，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解定容，过滤，滤液进入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长277nm处检测连翘苷的吸收值，计算出其含量。 |
试剂： |
1. 乙腈（色谱纯) 2 .甲醇 3 .乙醇 4 .乙酸铅 5 .中性氧化铝（100-200目) |
仪器设备： |
1. 仪器 1.1 高效液相色谱仪 1.2 色谱柱 ODS Hypersil色谱柱（125×4mm，5μm)，理论塔板数以连翘苷峰计算为5449。 1.3 紫外吸收检测器 2. 色谱条件 2.1 流动相：乙腈 水 = 25 75 2.2 检测波长：277nm 2.3柱温：室温 |
试样制备： |
1. 称取供试品 精密称取本品粉末（过五号筛-80目)试样适量（相当于连翘生药8g)。 2. 对照品溶液的制备 精密称取连翘苷对照品5mg，置25mL量瓶中，加甲醇适量超声处理使溶解，并稀释至刻度，混匀，得对照品溶液。 3.供试品溶液的制备 将供试品置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇40mL，将塞塞紧，精密称定重量，超声处理20分钟，取出锥形瓶，放冷，精密称定重量，用甲醇补足减失的重量，滤过。精密量取续滤液20mL，加乙酸铅2g，过滤，精密量取续滤液10mL，置水浴上蒸至近干，加0.5g中性氧化铝拌样后，水浴蒸干，加于中性氧化铝柱（100-200目层析用中性氧化铝1g，柱内径10-15mm)上，以70%乙醇80mL洗脱，收集洗脱液，水浴浓缩至干，滤过，残留物以50%甲醇适量超声处理使溶解，定量转移至5mL容量瓶中，稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液为供试品溶液。 注：“精密称取”系指称取重量应准确至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。 |
操作步骤： |
1. 标准曲线绘制 精密吸取对照品溶液0.5，2，6，10，15，20μL注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器，于波长277nm处测定连翘苷的吸收值，以进样量对峰面积绘制标准曲线，进行线性回归，得到回归方程。 2. 供试品的测定 分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各10μL注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器，于波长277nm处测定连翘苷的吸收值，计算出其含量。 |
参考文献： |
聂东东，杨丽娟，宋维秋. HPLC法测定双黄连制剂中连翘苷的含量. 中国药房，2000，11（6)：275-276. |
