方法名称： |
桂林西瓜霜喷剂—靛玉红和苦参碱的测定－薄层扫描法 |
应用范围： |
本方法采用薄层扫描法测定桂林西瓜霜喷剂中靛玉红和苦参碱的含量。 本方法适用于中成药桂林西瓜霜喷剂。 |
方法原理： |
供试品于索氏提取器中经氯仿加热回流，提取液回收，浓缩并挥干溶剂，残渣用无水乙醇溶解，制成供试液，点样、展开，用薄层扫描仪进行扫描，于波长λS=540nm，λR=650nm测量靛玉红，在波长λS=510nm，λR=650nm测量苦参碱吸收度积分值，分别计算其含量。 |
试剂： |
1.苯 2.丙酮 3.氯仿 4.甲苯 5.乙醇 6.浓氨水 |
仪器设备： |
1仪器 1.1索氏提取器 1.2薄层扫描仪 1.3薄层自动铺板器 1.4定量点样毛细管 1.5展开室 可用适合薄层板大小的专用玻璃缸，底部平底或双槽，盖子须密闭。 2材料 2.1玻板 用20cm×10cm的规格，要求光滑、平整，洗净后不附水珠，晾干。 2.2吸附剂 硅胶G |
试样制备： |
1.对照品溶液的制备 分别精密称取靛玉红和苦参碱对照品适量。靛玉红对照品用氯仿溶解制成浓度为0.081mg/mL溶液；苦参碱对照品用甲醇溶解制成浓度为1.8mg/mL溶液。 2,对照药材溶液的制备 各取青黛、山豆根对照药材粉末约1g，置具塞三角烧瓶中。分别加入氯仿50mL（其中山豆根对照药材先加入氨水2mL润湿)，冷浸过夜。滤过，滤液水溶液浓缩并挥干溶剂，残渣用无水乙醇适量使溶解即得。 3.供试品溶液的制备 精密称取供试品约2g，加入氯仿100mL于索氏提取器中回流提取至提取液近无色（其中苦参碱含量测定供试品先加氨水2mL使润湿)，提取液回收溶剂，浓缩并挥干溶剂，残渣用无水乙醇适量使溶解并定容于5mL量瓶中，摇匀，即得。 注：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。 |
操作步骤： |
1.薄层板制备 将吸附剂1份和水3份在研钵中向一方向研磨混合，去除表面的气泡后，倒入涂布器中，在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为0.25～0.5mm)取下涂好薄层的玻板，于室温下，置水平台上晾干，在反射光及透射光下检视，表面应均匀，平整，无麻点、无气泡、无破损及污染，于110℃烘30分钟，冷却后立即使用或置干燥箱中备用，或用商品预制板。 2.点样 2.1对照品点样 精密吸取靛玉红对照品溶液4.0,6.0,8.0,10.0,12.0μL,点于同一块硅胶G薄层板上。另外精密吸取苦参碱对照品溶液1.0,2.0,3.0,4.0和5.0μL,点于同一块硅胶G薄层板上，如用点样器点样到薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边1.0～1.5cm，样点直径一般不大于2mm，点间距离可视斑点扩散情况，以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。 2.2供试品点样 精密吸取供试液10μL，靛玉红对照品溶液6μL和8μL，点于同一块硅胶G薄层板上，；同样吸取供试品10μL，苦参碱对照液2μL和3μL，点于另一硅胶G薄层板上。 注：供试品溶液与对照品溶液应分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，如用点样器点样到薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边1.0～1.5cm，样点直径一般不大于2mm，点间距离可视斑点扩散情况，以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。 3.展开 将点好靛玉红对照品溶液和供试品溶液的两块薄层板分别放入展开缸的展开剂中，以苯-氯仿-丙酮(5:4:1)为展开剂，展距10cm，取出薄层板，晾干，可见光下检识。供试品色谱与青黛对照药材和靛玉红对照品色谱在相应位置上显相同紫红色斑点。 同样将点好苦参碱对照品和供试品溶液的薄层板分别放入展开缸的展开剂中，以甲苯-丙酮-乙醇-浓氨水(20:20:3:1)为展开剂（双槽展开缸，预饱和15min)，展距10cm，碘化铋钾试液喷雾显色，供试品色谱与山豆根对照药材和苦参碱对照品色谱在相应位置显相同橙红色斑点。 4.标准曲线的绘制 将6.2.1项下的薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，选择反射方式，采用吸收法，用双波长进行扫描，于波长λS=540nm，λR=650nm测量靛玉红，在波长λS=510nm，λR=650nm测量苦参碱吸收度积分值，以斑点面积积分值对点样量作线性回归，绘制标准曲线。 5.供试品溶液的测定 将6.2.2项下的薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，选择反射方式，采用吸收法，用双波长进行扫描，于波长λS=540nm，λR=650nm测量靛玉红，在波长λS=510nm，λR=650nm测量苦参碱吸收度积分值，分别计算其含量。 |
参考文献： |
陈勇，甄汉深，石勇新，等.薄层扫描法测定桂林西瓜霜喷剂中靛玉红和苦参碱的含量.中成药，1998，20（7)：13-14 |
