方法名称： |
四维灵芝液—核苷类成分的测定—高效毛细管电泳法 |
应用范围： |
本方法采用高效毛细管电泳法测定四维灵芝液中的核苷类成分腺苷及鸟苷的含量。 本方法适用于四维灵芝液。 |
方法原理： |
取供试品，离心取上清液，加于于处理好的大孔吸附树脂上，依次以水、30%乙醇洗脱，收集30%乙醇部分，水浴上蒸干，残渣以水溶解定容，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，滤液作为供试品溶液，注入高效毛细管电泳仪进行电泳分离，用紫外检测器检测腺苷及鸟苷的相应值，计算其含量。 |
试剂： |
1.乙醇 2 .硼砂 3. 十二烷基磺酸钠（SDS) |
仪器设备： |
1 仪器 1.1 高效毛细管电泳仪 1.2 熔融石英毛细管柱（75μm×57cm，有效柱长50cm) 1.3紫外检测器 2 分离条件 2.1 运行缓冲液：20nmol/L硼砂（含30mmol/LSDS，pH 10.0) 95%乙醇 = 95 5 2.2 气动进样：20psi, 15s 2.3 柱温：20℃ 2.4 检测波长：254nm |
试样制备： |
1.称取供试品 精密量取四维灵芝液20mL。 2. 对照品储备溶液的制备 精密称取腺苷及鸟苷适量，用水为溶剂配制成浓度为0.1mg/L的对照品储备溶液。 3. 内标溶液的制备 精密称取内标磺胺甲恶唑适量，用水为溶剂配制成浓度为0.2mg/L的内标溶液 4. 标准溶液的制备 精密吸取对照品储备溶液各0.1、0.3、0.5、0.7、1.0、2.0mL，置于5mL量瓶中，各加入内标1mL，加水至刻度，摇匀，得系列浓度的标准溶液。 5.供试品溶液的制备 取供试品，离心取上清液，加于于处理好的大孔吸附树脂小柱（1.5×11cm)上，依次以水50mL、30%乙醇100mL洗脱，收集30%乙醇部分，水浴上蒸干，残渣以水溶解定量转移至5mL量瓶中，加内标液1mL，加水至刻度，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，滤液作为供试品溶液， 注：“精密称取”系指称取重量应准确至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。 |
操作步骤： |
1. 标准曲线的绘制 上述系列浓度标准溶液分别注入高效毛细管电泳仪进行电泳分离，以紫外检测器检测，检测波长为254nm，将腺苷及鸟苷的浓度对其峰面积与内标峰面积比绘制标准曲线，进行线性回归，得到回归方程。 2. 供试品的测定 上述供试品溶液注入高效毛细管电泳仪进行电泳分离，以紫外检测器检测，检测波长为254nm，记录腺苷及鸟苷的相应值，计算其含量。 |
参考文献： |
戴敬，鲁静，林瑞超等.高效毛细管电泳法测定四维灵芝液中核苷类成分的含量. 中国中药杂志，2002，27（9)：665-668. |
