方法名称： |
颠茄酊—阿托品、东莨菪碱、山莨菪碱的测定—高效毛细管电泳法 |
应用范围： |
本方法采用高效毛细管电泳法测定颠茄酊中阿托品、东莨菪碱、山莨菪碱的含量。 本方法适用于中成药颠茄酊。 |
方法原理： |
供试品加磷酸盐缓冲溶液及内标溶液，用双蒸水稀释定容,混匀，以2000r/min离心5min后，量取上清液进行高效毛细管电泳分析。 |
试剂： |
1. 四氢呋喃 2. 50mmol/L磷酸盐缓冲溶液(pH8.0) |
仪器设备： |
1 仪器 1.1 高效毛细管电泳仪 1.2 毛细管柱：40cm × 50μm 1.3 紫外吸收检测器 1.4 pHs-25酸度计 2电泳分离条件 2.1 运行缓冲液：50mmol/L磷酸溶液(pH8.0) 四氢呋喃 = 9 1 2.2 电迁移进样：5 kV × 5s 2.3 分离电压：11kV ( )→(-) 2.4 柱温：24℃ 2.5 检测波长：200nm |
试样制备： |
1.内标溶液的制备 精密称取麻黄适量，用双蒸水稀释配成制成每1mL含麻黄140μg的溶液,作为内标溶液。 2.对照品溶液的制备 精密称取硫酸阿托品、东莨菪碱、山莨菪碱对照品适量，置于同一5mL量瓶中，用双蒸水稀释配成制成含阿托品600μg/mL、东莨菪碱90μg/mL、山莨菪碱100μg/mL的混合溶液，作为对照品储备液。 3.标准溶液的制备 精密吸取上述对照品储备液50、100、150、200、250μL，加内标溶液100μL，用双蒸水稀释定容至1mL，混匀，以2000r/min离心5min后，作为绘制标准曲线的系列浓度标准溶液。 4.供试品溶液的制备 精密量取供试品400μL，加50mmol/L磷酸盐缓冲溶液(pH8.0)100μL，加内标溶液100μL，用双蒸水稀释定容至1mL,混匀，以2000r/min离心5min后，作为供试品溶液。 注：“精密称取”系指称取重量应准确至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。 |
操作步骤： |
1. 标准曲线的绘制 精密吸取上述标准溶液各50μL，置高效毛细管电泳仪中测定，以对照品峰面积与内标峰面积的比值对相应的浓度绘制标准曲线，进行线性回归，得到各自的回归方程。 2. 供试品的测定 精密吸取上述供试品溶液50μL，置高效毛细管电泳仪中测定，计算出其含量。 |
参考文献： |
林梅，张正行，安登魁等. 高效毛细管电泳分离测定颠茄制剂中莨菪类生物碱. 中草药，1998，29(8)：518-520. |
