方法名称： |
黄连上清丸—大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的测定—高效液相色谱法 |
应用范围： |
本方法采用高效液相色谱法测定黄连上清丸中大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量。 本方法适用于中成药黄连上清丸。 |
方法原理： |
将供试品置索氏提取器内，加氯仿浸泡提取，提取液以氢氧化钠水溶液洗至无色，合并洗涤液作为供试品液。精密吸取对照品溶液和供试品液，分别注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器，于波长254nm处检测大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的吸收值，以外标法计算含量。 |
试剂： |
1. 乙腈（色谱纯) 2. 0.5%氢氧化钠水溶液 3. 0.1%磷酸水溶液 4.氯仿 |
仪器设备： |
1 仪器 1.1 高效液相色谱仪 1.2 色谱柱 Spherrisorb C18 柱 (300 × 4.6mm，5µm)。 1.3 紫外吸收检测器 1.4 索氏提取器 2 色谱条件 2.1 流动相：乙腈 0.1%磷酸水溶液 = 90 10 2.2 流速：0.6mL/min 2.3 检测波长：254nm 2.4 柱温：45℃ |
试样制备： |
1. 称取供试品 精密称取本品细粉(过五号筛-80目) 1g。 2. 对照品溶液的制备 精密称取大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品，以氯仿溶液，制成每1mL含大黄素、大黄酚、大黄素甲醚分别为0.2mg、0.18mg、0.12mg的溶液，分别精密吸取1mL，置10 mL量瓶内，加氯仿稀释至刻度，作为对照品溶液。 3. 供试品溶液的制备 将供试品置索氏提取器内，加氯仿浸泡过夜，提取8h，提取液以0.5％氢氧化钠水溶液100 mL分次洗涤，至洗涤液无色，并合并至100 mL量瓶内，定容，作为供试品液。 注：“精密称取”系指称取重量应准确至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。 |
操作步骤： |
1.标准曲线的绘制 分别精密吸取上述对照品液4、6、8、10、12µL，注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器，于波长254nm处分别测定大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的吸收值，以对照品溶液进样量对峰面积绘制标准曲线，进行线性回归，得到回归方程。 2. 供试品测定 精密吸取对照品溶液4µL、12µL，供试品液10µL，分别注入液相色谱仪，用紫外吸收检测器，于波长254nm处测定大黄酚的吸收值，以外标法计算出其含量。 |
参考文献： |
姚仲青. HPLC同时测定黄连上清丸中大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量.中草药，2001，22(8)：699-700. |
