方法名称： |
葛根芩连微丸－葛根素的测定－薄层扫描法 |
应用范围： |
本方法采用薄层扫描法测定葛根芩连微丸中葛根素的含量。 本方法适用于中成药葛根芩连微丸。 |
方法原理： |
供试品加无水乙醇超声提取，过滤，滤液过中性氧化铝柱，滤液蒸干，加入无水乙醇溶解，制成供试液，点样、展开，置紫外灯下观察，用薄层扫描仪进行扫描，于波长λS=256nm，λR=360nm测量葛根素吸收度积分值，计算其含量。 |
试剂： |
1. 甲醇 2. 氯仿 3. 无水乙醇 |
仪器设备： |
1 仪器 1.1 电子天平 1.2 薄层扫描仪 1.3 涂布器 应能使吸附剂在玻璃板上手工或自动涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。 1.4点样器 一般采用微升毛细管或与之相应的点样器材。 1.5展开室 适合薄层板大小的专用玻璃缸，底部平底或双槽，盖子须密闭。 2材料 2.1玻板 要求光滑、平整，洗净后不附水珠，晾干。 2.2吸附剂 硅胶G，其颗粒大小一般要求直径为10～40μm。 |
试样制备： |
1. 供试品的称量 精密称取本品(通过四号筛-65目)约0.54g，60℃干燥l h 2. 对照品溶液的制备 精密称取葛根素对照品适量，加乙醇制成lmL含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。 3. 供试品溶液的制备 将供试品置具塞三角瓶中，加无水乙醇25mL，超声15min，滤过，无水乙醇洗涤滤渣和容器2次，每次10mL，合并滤液、洗液，回收乙醇，蒸至约5mL，加于已处理好的中性氧化铝柱(内径9mm，100-200目，5g，无水乙醇湿法装柱)上，先用无水乙醇20mL洗脱，后改用70％乙醇50mL洗脱，收集70％乙醇洗脱液，蒸干，残渣用乙醇分次溶解，定量移入10mL量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。 |
操作步骤： |
1.薄层板制备 将吸附剂1份和水3份在研钵中向一方向研磨混合，去除表面的气泡后，倒入涂布器中，在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为0.25～0.5mm)取下涂好薄层的玻板，于室温下，置水平台上晾干，在反射光及透射光下检视，表面应均匀，平整，无麻点、无气泡、无破损及污染，于110℃烘30分钟，冷却后立即使用或置干燥箱中备用，或用商品预制板。 2.点样 精密吸取供试品溶液2μL、对照品溶液2μL与4μL，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，如用点样器点样到薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边1.0～1.5cm，样点直径一般不大于2mm，点间距离可视斑点扩散情况，以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。 3.展开 将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中，以氯仿－甲醇－水（60:35:10)10℃以下放置12小时的下层溶液为展开剂，展开至8～15cm时，取出薄层板，晾干，在365nm紫外灯下检视。 4.标准曲线的绘制 分别精密吸取1、2、3、4、5μL按以上色谱条件点于薄层板上，展开，扫描，以吸收峰面积与对照品点样量绘制标准曲线，进行线性回归，得到回归方程。 5.含量测定 在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，选择反射方式，采用吸收法，用双波长进行扫描，波长：λS =256nm，λR=360nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算。 |
参考文献： |
夏宏. 葛根芩连微丸中葛根素的含量测定. 中国医院药学杂志，2002，22（11)：681-682. |
