黄连上清丸—栀子甙的测定—高效液相色谱法

本方法采用高效液相色谱法测定黄连上清丸中栀子甙的含量。

本方法适用于中成药黄连上清丸。

将供试品加水超声提取，加水定容，过滤，续滤液通过大孔吸附树脂柱，收集乙醇洗脱液，进入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器，于波长240nm处检测黄芩甙吸收值，以外标法计算含量。

1. 甲醇（色谱纯)

2. 乙腈（色谱纯)

3. 0.1%磷酸水溶液

4. 乙醇

1 仪器

1.1 高效液相色谱仪

1.2 色谱柱

Spherrisorb C₁₈ 柱 (300 × 4.6mm，5µm)，理论板数按栀子甙峰计算应不低于4000。

1.3 紫外吸收检测器

2 色谱条件

2.1 流动相：甲醇 乙腈 0.1%磷酸水溶液 = 25 7 70

2.2 流速：0.6mL/min

2.3 检测波长：240nm

2.4 柱温：30℃

1. 称取供试品

精密称取本品粉末2g。

2. 对照品溶液的制备

精密称取桅子甙对照品8.4mg，置10mL量瓶内，加甲醇溶解至刻度，摇匀，作为对照品储备液。

3. 标准溶液的制备

精密吸取对照品储备液125µL、250µL、0.5mL、1.0mL、1.5mL，至10mL量瓶内，并加甲醇至刻度，摇匀，作为绘制标准曲线的系列浓度标准溶液。

4.供试品溶液的制备

将供试品置100mL量瓶内，加水90mL，浸泡1h。置超声器内超声提取20min，取出。加水至刻度，过滤。弃去初滤液，取续滤液50.0mL，置已处理好的大孔吸附树脂柱内(1.2 × 10cm)，以2mL/min的流速缓慢通过树脂柱。继以水洗至流出液无色(40mL/min)，再以50％乙醇100mL洗脱(2mL/min)。收集乙醇洗脱液于100mL量瓶内并稀释至刻度，作为供试品溶液。

注：“精密称取”系指称取重量应准确至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

1.标准曲线的绘制

精密吸取上述标准溶液10µL，注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器，于波长240nm处测定栀子甙的吸收值，以栀子甙进样量对峰面积绘制标准曲线，进行线性回归，得到回归方程。

2. 供试品的测定

精密吸取供试品液10µL，注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器，于波长240nm处测定栀子甙的吸收值，用外标法计算出其含量。

李丽. HPLC法测定黄连上清丸中栀子甙的含量. 中成药，2000，22(2)：133-134.