方法名称： |
六味地黄丸-丹皮酚测定-高效毛细管电泳法 |
应用范围： |
本方法采用高效毛细管电泳法测定六味地黄丸中丹皮酚的含量。 本方法适用于中成药六味地黄丸。 |
方法原理： |
供试品粉碎后，与硅藻土研匀，无水乙醇超声波振荡提取，过滤后定容，加入内标，用高效毛细管电泳仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长274nm处检测丹皮酚的吸收值，计算其含量。 |
试剂： |
1. 硼砂 2. 乙醇 3. 十二烷基硫酸钠(SDS) 4. 芦丁 5. 丹皮酚对照品（中国药品生物制品检定所) 6. 水为去离子水 |
仪器设备： |
1 仪器 1.1 高效毛细管电泳仪 1.2 色谱柱 未涂层熔硅弹性石英毛细管内径75μm；，柱长55cm，有效柱长50cm。 1.3紫外吸收检测器 2 色谱条件 2.1缓冲盐： 20mmol/L SDS－50mmol/L硼砂 2.2检测波长：274nm 2.3 重力进样(10cm×5S) 2.4运行电压：15KV 2.5 电泳温度：20℃ |
试样制备： |
1. 对照品溶液的制备 精确称取取丹皮酚对照品9.1mg于10mL量瓶中，无水乙醇溶解并稀释至刻度，作为对照品溶液。精密吸取丹皮酚对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml于10ml量瓶中，各加入芦丁内标液1ml，无水乙醇溶液定容至刻度。 2. 内标溶液的制备 称取芦丁52mg，用无水乙醇溶解并稀释至100mL，作为内标。 3.供试品溶液的制备 取六味地黄丸粉碎后，称取粉末3g，与5g硅藻土(色谱载体，40～60目)混研，研匀，烘干，无水乙醇超声波振荡提取30min，过滤后定容至50mL，取该溶液8mL，加入内标 1mL，无水乙醇稀释至10mL，作为供试品溶液。 |
操作步骤： |
1. 标准曲线的建立 依法进样测定，以丹皮酚对照品峰面积与内标峰面积的比值对其浓度绘制标准曲线，计算线性回归方程。得Y=-0.0279X－0.0411，r=0.9997，线性范围为18.2～91mg/L。 2. 样品测定 取供试品溶液，依法进样测量，记录各组份峰面积值，计算没食子酸的含量。 注：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。 |
参考文献： |
赵新峰，孙毓庆，胶束电动毛细管色谱法测定牡丹皮及六味地黄丸中丹皮酚的含量，沈阳药科大学学报，2002，19（1)：35～37，55 |
