更年安片-五味子甲素测定/五味子乙素测定-高效液相色谱法

本方法采用高效液相色谱法测定更年安片中五味子甲素和五味子乙素的含量。

本方法适用于中成药更年安片。

供试品加环己烷超声提取，挥干，残渣用甲醇-乙腈（1∶1) 超声提取定容，过滤，用高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长254nm处检测五味子甲素和五味子乙素的吸收值，计算其含量。

1. 甲醇(色谱纯)

2.乙腈(色谱纯)

3. 五味子甲素对照品（中国药品生物制品检定所)

4. 五味子乙素对照品（中国药品生物制品检定所)

5. 环己烷

1 仪器

1.1 高效液相色谱仪

1.2 色谱柱

十八烷基硅胶键合硅胶为填充剂（Phenomenex C₁₈，5μm，250mm×4.6mm)，理论板数按五味子甲素和五味子乙素计应不低于5000。

1.3 紫外吸收检测器

1.4 超声发生器

2 色谱条件

2.1流动相：乙腈＋甲醇＋水＝15＋15＋10。

2.2检测波长：254nm

2.3柱温：室温

1. 对照品储备液的制备

精密称取五味子甲素和五味子乙素对照品置量瓶中，用甲醇配成五味子甲素960.0μg/mL和五味子乙素960.0μg/mL对照品储备液。分别精密吸取对照品储备液0.05，0.1，0.2，0.5，1.0，2.0mL置25mL容量瓶中加甲醇稀释至刻度。

2. 供试品溶液的制备

取更年安糖衣片10片，去糖衣，称重（0.36克/片)，研细，精密称取1g，置25mL容量瓶中，精密加环己烷至刻度，超声10min，过滤至50mL锥形瓶中，水浴加热，挥干。残渣用甲醇-乙腈（1∶1)10mL少量多次提取，每次超声10min，提取液置25mL容量瓶中定容，摇匀。用微孔滤膜过滤。弃去初滤液，续滤液备用。

1. 标准曲线的建立

按上述色谱条件，分别重复进样，测定，记录峰面积。分别以五味子甲素对照品峰面积均值A和五味子乙素对照品峰面积均值A对其浓度C（μg/mL)线性回归，得回归方程：

五味子甲素：A=21485C-4737，r=0.9996

五味子乙素：A=14729C 2470，r=0.9998

五味子甲素和五味子乙素均在1.0～80μg/mL范围内呈良好的线性关系。

2. 样品含量测定　

精密吸取供试品溶液10μL注入高效液相色谱仪，依法进样测定，外标法计算五味子甲素和五味子乙素的含量。

注：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

崔兰贵，王火，朱铁梁等等，HPLC法测定更年安中五味子甲素和五味子乙素的含量，中草药，2001，32（5)：409～411