方法名称： |
保赤散—朱砂含量测定—高效液相色谱法 |
应用范围： |
本方法采用高效液相色谱法测定保赤散中朱砂的含量。 本方法适用于保赤散等含朱砂的散剂。 |
方法原理： |
供试品消化后,以二乙基二硫代氨基甲酸钠(ＤＥＤＴＣ)为配合剂,再用ＨＰＬＣ对ＨｇＤＥＤＴＣ的配合物用高效液相色谱仪进行分离，紫外吸收检测器于波长270nm处测定吸收值，计算出其含量。 |
试剂： |
1. 甲醇（色谱纯) 2.水（重蒸馏水) 3. 硝酸、高氯酸、丙酮、氯化汞、ＤＥＤＴＣ(ＡＣＲＯＳ,ＵＳＡ)均为分析纯 4. Ｈｇ ＤＥＤＴＣ配合物(自制) |
仪器设备： |
1 仪器 1.1 高效液相色谱仪 1.2 色谱柱 ＷａｔｅｒｓＸ ＴｅｒｒａＣ18色谱柱（150mm×3.9mm, 4μm) 1.3 紫外吸收检测器 1.4 超声清洗器 2 色谱条件 2.1 流动相：甲醇 0.01mol/L磷酸氢二钠溶液=73 27 2.2 检测波长：270nm 2.3 柱温：35℃ 2.4 流速：0.8ml/min。进样量:10μＬ。 |
试样制备： |
1. 称取供试品 精密称取供试品粉末（过四号筛)约0.05g。 2. 标准溶液的制备 取真空干燥至恒重的ＨｇＣｌ2约68ｍｇ,精密称定,置于50ｍＬ量瓶中,以水溶解并定容至刻度。精密量取0 5ｍＬ,加水1 5ｍＬ,加入ＤＥＤＴＣ15ｍｇ,摇匀,以丙酮溶解沉淀并定容至10ｍＬ,0 45μｍ微孔滤膜过滤。 3. 供试品溶液的制备 精密称取供试品约62ｍｇ,置于消化罐中,加入2ｍＬ消化液(ＨＮＯ3 ＨＣｌＯ4,体积比为9∶1),密塞,置于120℃烘箱中,消化4ｈ后取出冷却。打开消化罐,将消化液转移至10ｍＬ容量瓶,用超纯水清洗消化罐数次,合并清洗液于容量瓶,用水定容至刻度,摇匀。精密量取2ｍＬ消化液,置于离心管中,加入0 6ｍＬ 5ｍｏｌ/Ｌ的氢氧化钠溶液,加酚酞指示剂1滴,然后加入1ｍＬ饱和醋酸钠缓冲液(ｐＨ8 0),摇匀,溶液应呈粉红色(必要时用1ｍｏｌ/Ｌ的氢氧化钠溶液调节溶液碱度,使其呈粉红色)。加入15ｍｇＤＥＤＴＣ,振摇,以3000ｒ/ｍｉｎ速率离心15ｍｉｎ,弃去上清液,将沉淀用丙酮溶解,全部转移并用丙酮定容至10ｍＬ,用0 45μｍ微孔滤膜过滤。 |
操作步骤： |
1. 标准曲线的绘制 精密吸取上述标准溶液10μL注入高效液相色谱仪，用紫外检测器测定ＨｇＤＥＤＴＣ配合物的吸收度值，以标准溶液浓度对峰面积绘制标准曲线，进行线性回归，得到回归方程。 2. 供试品的测定 精密吸取供试品溶液10ul注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器，于波长270nm处测定ＨｇＤＥＤＴＣ配合物的吸收值，计算出其含量。 |
参考文献： |
孔爱英,姜雄平,魏立平. 高效液相色谱法测定紫金红胶囊中朱砂的含量.色谱,20(5):449－450 |
