九分散－马钱子成分的鉴定－凝胶电泳法

本方法采用凝胶电泳法定性检测九分散中的马钱子。

1. 甲叉双丙烯酰胺（含量不低于98.5%)

2. 丙烯酰胺（含量不低于98.5%)

3. 三羟甲基氨基甲烷（含量不低于99.8%)

4. 甘氨酸（分析纯)

5. 过硫酸铵（分析纯)

6. 考马斯亮兰（进口分装)

电泳仪

1 样品的制备

1.1单味药材:称取标准的中药材马钱子1G,加入Tris—HCl缓冲液5mL,研磨匀浆,离心20分钟,上清液置冰箱中备用。

1.2中成药:九分散由马钱子、麻黄、乳香、没药四味药组成,其中乳香、没药均为树脂类药材,用乙醚多次溶解,脱去大部分树脂,残渣挥尽乙醚后,同上法匀浆离心后备用。

2试剂的配制

2.1分离胶缓冲液(pH8.9):取36.6 gTris、48.0mL 1N HCl调pH8.9、加水至100mL。

2.2分离胶贮液:取28ｇ丙烯酰胺(ACR),0.74gBis加水至100mL,过滤后使用。

2.3过硫酸铵溶液:0.56g过硫酸铵溶于100mL H₂O中。

2.4浓缩胶缓冲液(pH6.7):5.98gTris、48.0mL 1N HCl调pH6.7,加水至100mL。

2.5浓缩胶贮液:10gACR,2.5gBis加水至100 mL,过滤后使用。

2.6核黄素溶液:4mg核黄素加水至100mL。

2.740%蔗糖溶液:40g蔗糖,加水至100mL。

2.8电极缓冲液:先配成贮液,6 gTris,28.8g甘氨酸,用水溶成100mL (pH8.3),用前再稀释10倍。

1. 电泳

分别取上述各种样品的上清液各20μl,用微量注射器点样于浓缩胶的样品模子中,加入电极缓冲液,向上槽缓冲液中加入1～2滴溴酚兰指示剂示踪,电泳开始后,电流控制在10mA,样品进入分离胶后加大到30mA,待指示剂行至末端1cm时,即可停止电泳,约需2～3小时。

2.染色、脱色

取出胶板后,放入0.2%考马斯亮兰(R250)染色液中,在36℃染色1小时,再用20%甲醇和7%HAC的脱色液在36℃进行脱色,直至背景清晰为止，得到电泳图谱。

王应斌，穆仙丽，宿永成等. 中成药九分散的PAGE分析. 内蒙古中医药，2002，06：34