方法名称： |
三妙丸－脱皮甾酮含量的测定－薄层扫描法 |
应用范围： |
本方法采用薄层扫描法测定三妙丸中脱皮甾酮的含量。 本方法适用于三妙丸、牛膝等成药。 |
方法原理： |
将原药中的有效成分提取后，所得溶液点样展开，经薄层扫描法测定相应峰面积，所得图谱与对照品图谱进行对比分析，采用外标二点法计算三妙丸中脱皮甾酮的含量。 |
试剂： |
1. 甲醇、正丁醇、乙醇、氧化铝、乙酸乙酯（分析纯) 2. 脱皮甾酮对照品 |
仪器设备： |
1 仪器 1.1 CS－9301双波长薄层扫描仪（日本岛津)（Waters公司) 1.2 PBQ－型薄层铺板仪（重庆) 2 薄层展开条件 乙酸乙酯：乙醇＝4：1 3 薄层扫描条件 3.1波长：双波长反射法锯齿扫描，λs＝251nm，λR＝340nm 3.2狭缝：1.2×1.2mm，SX＝3，灵敏度中。 |
试样制备： |
1 供试品溶液的制备 取干燥至恒重的三妙丸粗粉15g，精密测定，加乙醇150mL，于索氏提取器中水浴提取7小时，过滤后滤液水浴挥至少量时加沸水40mL，冷却后用水饱和正丁醇萃至近无色时，合并萃取液，水浴上挥散至近干时加入氧化铝1g，低温烘干，研细后装入制备好的氧化铝（中性氧化铝，25℃活化2h)柱中，柱内径0.8cm，柱长7cm，样品约高1cm，先用乙酸乙酯6mL，洗脱后弃去。再用乙醇洗脱收集黄色洗脱液弃去，收集随后的无色乙醇洗脱液15mL，挥干，用甲醇定容至2mL，所得溶液作为供试品溶液，待用。 2 对照品溶液的配制 精密称取脱皮甾酮对照品5.32mg，至5mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，所得溶液作为对照品溶液待用。 注：“精密称取”系指称取重量应准确至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。 |
操作步骤： |
1.标准曲线的绘制 用定量毛细管分别精密吸取对照品溶液2、4、6、8、10μL分别点于同一硅胶薄层板上，用乙酸乙酯－乙醇（4：1)饱和30min后展开，晾干，紫外灯下定位，置薄层扫描仪中按上述扫描条件测定，将峰面积与进样量进行线性回归，标绘制标准曲线，得到回归方程。 2. 供试品的测定 精密吸取上述供试品溶液以及对照品溶液各一定体积，点于同一硅胶薄层板上，用乙酸乙酯（4：1)展开，用外标二点法按上述扫描条件进行测定。 |
参考文献： |
宋闫军,尚聪敏. 牛膝及三妙丸中脱皮甾酮的薄层扫描测定.河南中医药学刊，2000，15（6)：9-10. |
