方法名称: |
新清宁片—大黄素的测定—高效液相色谱法 |
应用范围: |
本方法采用高效液相色谱法测定新清宁片中大黄素的含量。 本方法适用于由熟大黄等几味中药制成的新清宁片。 |
方法原理: |
供试品粉末置磨口锥形瓶中,精密加入无水乙醇,塞紧,称定重量,置水浴上加热回流1h,放冷,用乙醇补足减失的重量,滤过,精密量取续滤液,置烧瓶中,水浴蒸干,加30%乙醇-盐酸(10:1)溶液,置水浴中加热水解1h,立即冷却,用氯仿强力振摇提取4次,合并氯仿液,置水浴上蒸干,残渣用无水乙醇-醋酸乙酯(2:1)溶解,移置量瓶中,并稀释至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45μm)过滤,精密吸取续滤液10μL,注入高效液相色谱仪,用紫外检测器检测大黄素的吸收值,计算出其含量。 |
试剂: |
1. 甲醇(色谱纯) 2. 无水乙醇、醋酸乙酯(分析纯) 3. 大黄素(购自中国药品生物制品检定所) |
仪器设备: |
1 仪器 1.1 高效液相色谱仪 1.2 色谱柱 Nucleosil ODS C18柱(250mm×4.6mm,5μm)。 1.3 紫外检测器 2 色谱条件 2.1 流动相:甲醇 水=85 15(含0.1%的磷酸) 2.2 柱温:室温 2.3 检测波长:254 nm 2.4 流速:1.0mL/min |
试样制备: |
1. 称取供试品 取本品20片,除去包衣,精密称定,研细(过65目筛),精密称取药粉0.5g。 2. 对照品溶液的制备 精密称取大黄素对照品适量,用无水乙醇-醋酸乙酯(2:1)溶解制成浓度为0.05mg/ml,作为对照品溶液。 3. 供试品溶液的制备 供试品粉末置磨口锥形瓶中,精密加入无水乙醇25ml,塞紧,称定重量,置水浴上加热回流1h,放冷,用乙醇补足减失的重量,滤过,精密量取续滤液10ml,置烧瓶中,水浴蒸干,加30%乙醇-盐酸(10:1)溶液15ml,置水浴中加热水解1h,立即冷却,用氯仿强力振摇提取4次,每次15ml,合并氯仿液,置水浴上蒸干,残渣用无水乙醇-醋酸乙酯(2:1)溶解,移置25ml量瓶中,并稀释至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45μm)过滤,取续滤液作为供试品溶液。 |
操作步骤: |
1.标准曲线的绘制 分别精密吸取上述对照液2 、4 、6 、8、10μl进样,用紫外检测器测定大黄素的吸收度值,以标准溶液浓度对峰面积绘制标准曲线,进行线性回归,得到回归方程。 2. 供试品的测定 精密吸取上述供试品溶液10μL注入高效液相色谱仪,用紫外检测器测定大黄素的吸收度值,计算出其含量。 |
参考文献: |
苗明三,李振国 主编. 现代实用中药质量控制技术. 北京:人民卫生出版社,2000,83-84. |