方法名称: |
连翘提取物-连翘苷的测定-高效液相色谱法 |
应用范围: |
本方法采用高效液相色谱法测定连翘提取物中连翘苷的含量。 本方法适用于连翘经加工制成的提取物。 |
方法原理: |
本品加甲醇超声处理,放冷,补重,摇匀,滤过,续滤液蒸干,过柱,洗脱液浓缩至干,残渣用50%甲醇溶解定容,摇匀,滤过,续滤液进入高效液相色谱仪进行色谱分离,用紫外吸收检测器,于波长277nm处检测连翘苷的吸收值,计算出其含量。 |
试剂: |
1. 乙睛 2. 甲醇 3. 50%甲醇 4. 70%乙醇 |
仪器设备: |
1 仪器 1.1 高效液相色谱仪 1.2 色谱柱 十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,理论塔板数按连翘苷峰计算应不低于3000。 1.3 紫外吸收检测器 2色谱条件 2.1流动相:乙睛 水 =25 75 2.2检测波长:277nm 2.3柱温:室温 |
试样制备: |
1. 称取供试品 精密称定本品1g,为供试品。 2. 对照品溶液的制备 精密称取连翘苷对照品适量,加甲醇制成每1mL含0.2mg的溶液。 3. 供试品溶液的制备 取本品约0.2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加甲醇15mL,称定重量,浸渍过夜,超声处理(功率100W,频率40kHz)25分钟,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液5mL,蒸至近干,加中性氧化铝1.5g,拌匀,加置中性氧化铝柱(100~200目,3g,内径1~1.5cm)上,用70%乙醇240 mL洗脱,收集洗脱液,浓缩至干,残渣用50%甲醇溶解并转移至10mL量瓶中,加50%甲醇至刻度,摇匀,滤过,续滤液作为供试品溶液。 |
操作步骤: |
分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10mL,注入高效液相色谱仪,用紫外吸收检测器于波长277nm处测定连翘苷(C29H36O15)的峰面积,计算出其含量。 |
参考文献: |
中华人民共和国药典,国家药典委员会编,化学工业出版社,2005版,一部,p275。 |