方法名称: |
体外培育牛黄—胆红素的测定—紫外可见分光光度法 |
应用范围: |
本方法采用紫外可见分光光度法测定体外培育牛黄中胆红素的含量。 本方法适用于牛科动物牛Bos Taurus domesticus Gmelin的新鲜胆汁作母液,加入去氧胆酸、胆酸、复合胆红素钙等制成的体外培育牛黄的测定 |
方法原理: |
供试品经三氯甲烷-乙醇(7:3)的混合溶液加热回流,提取液加入乙醇和重氮化溶液,暗处放置后,置于分光光度计,于波长533nm处测定吸收度,按胆红素计算其含量。 |
试剂: |
1. 三氯甲烷-乙醇(7:3)的混合溶液 2 .乙醇 3 .重氮化溶液 4 .盐酸 |
仪器设备: |
1. 紫外-可见分光光度计 2. 分液漏斗 |
试样制备: |
1. 对照品溶液的制备 去胆红素对照品10mg,精密称定,置100 mL棕色量瓶中,用三氯甲烷溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取5 mL,置50 mL棕色量瓶中,加乙醇稀释至刻度,摇匀,制成每1mL含胆红素10μg的溶液。 2. 供试品溶液的制备 取本品细粉10mg,精密称定,置锥形瓶中,加三氯甲烷-乙醇(7:3)的混合溶液60 mL、盐酸1滴,摇匀,置水浴上加热回流30分钟,放冷,移至100 mL棕色量瓶中。容器用少量混合溶液洗涤,洗液并入同一量瓶中,加上述混合溶液至刻度,摇匀。精密量取3 mL,置具塞试管中,加乙醇至9 mL,精密加入重氮化溶液(甲液:取对氨基苯磺酸0.1g,加盐酸1.5 mL与水适量使成100 mL。乙液:取亚硝酸钠0.5g,用水溶解并稀释至100 mL,置冰箱内保存。临用时取甲液10 mL与乙液0.3 mL,混匀)1 mL,摇匀,在15~20℃的暗处放置1小时,作为供试品溶液。 |
操作步骤: |
1. 标准曲线的绘制 精密量取对照品溶液1mL、2mL、3mL、4 mL、5 mL,分别置具塞试管中,加乙醇至9 mL,各精密加入重氮化溶液(甲液:取对氨基苯磺酸0.1g,加盐酸1.5 mL与水适量使成100 mL。乙液:取亚硝酸钠0.5g,用水溶解并稀释至100 mL,置冰箱内保存。临用时取甲液10 mL与乙液0.3 mL,混匀)1 mL,摇匀,在15~20℃的暗处放置1小时,以相应的试剂为空白,在533nm波长处测定吸收度,以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线。 2. 供试品的测定 精密量取上述供试品溶液3mL,置具塞试管中,照标准曲线的制定项下的方法,自“加乙醇至9 mL”起,依法测定吸收度。 注:分光光度法应以配制供试品的同批溶剂为对照,采用1cm的石英吸收池。以吸收度最大的波长作为测定波长,一般供试品的吸收度读数,以在0.3-0.7之间的误差较小。仪器的狭缝波带宽度应小于供试品吸收带的半宽度,否则测得的吸收度偏低。狭缝宽度的选择,应以减少狭缝宽度时供试品的吸收度不再增加为准。由于吸收池和溶剂本身可能有空白吸收,因此测定供试品的吸收度后应减去空白读数,再计算含量。 |
参考文献: |
中华人民共和国药典,国家药典委员会编,化学工业出版社,2005年版,一部,p.120。 |