胆宁片－ 大黄素、大黄酚的测定－高效液相色谱法

本方法采用高效液相色谱法测定胆宁片中大黄素、大黄酚的含量。

本方法适用于中成药胆宁片。

本品加三氯甲烷加热回流，放冷，补重，摇匀，滤过，续滤液进入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长254nm处检测大黄素、大黄酚的吸收值，计算出其含量。

1.甲醇

2 .30%硫酸溶液

3 .三氯甲烷

4 .0.1%磷酸溶液

1 仪器

1.1 高效液相色谱仪

1.2 色谱柱

十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，理论塔板数按大黄素峰计算应不低于3000。

1.3 紫外吸收检测器

2色谱条件

2.1流动相：甲醇 0.1%磷酸溶液＝80 20

2.2检测波长：254nm

2.3柱温：室温

1. 称取供试品

取本品10片，除去包衣，精密称定，研细，取约0.35g，精密称定，为供试品。

2. 对照品溶液的制备

精密称取大黄素对照品和大黄酚对照品适量，加甲醇制成每1mL含大黄素12mg、大黄酚1.6mg的混合溶液。

3. 供试品溶液的制备

取本品10片，除去包衣，精密称定，研细，取约0.35g，精密称定，置圆底烧瓶中，加30%硫酸溶液10mL，用三氯甲烷加热回流提取3次（30 mL，20 mL，20 mL)，第一次2小时，第二、三次每次30分钟，合并三氯甲烷液提取液于分液漏斗中，用适量的水洗涤，三氯甲烷转移至100 mL量瓶中，加三氯甲烷至刻度，摇匀，精密量3mL，蒸干，残渣用甲醇溶解，并转移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10mL，注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器于波长254nm处测定大黄素（C₁₅H₁₀O₅)、大黄酚（C₁₅H₁₀O₄)的峰面积，计算出其含量。

中华人民共和国药典，国家药典委员会编，化学工业出版社，2005版，一部，p540。