牛黄上清胶囊－大黄素的测定－高效液相色谱法

本方法采用高效液相色谱法测定牛黄上清胶囊中大黄素的含量。

本方法适用于中成药牛黄上清胶囊。

本品依次加2.5mol/L硫酸溶液和三氯甲烷加热回流，蒸干提取液，残渣加甲醇溶解，摇匀，滤过，续滤液进入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长254nm处检测大黄素的吸收值，计算出其含量。

1. 2.5mol/L硫酸溶液

2 .甲醇

3 .三氯甲烷

4 .0.1%磷酸溶液

1 仪器

1.1 高效液相色谱仪

1.2 色谱柱

十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，理论塔板数按大黄素峰计算应不低于3000。

1.3 紫外吸收检测器

2色谱条件

2.1流动相：甲醇 0.1%磷酸溶液＝90 10

2.2检测波长：254nm

2.3柱温：室温

1. 称取供试品

取装量差异项下的本品内容物，混匀，取约0.3g，精密称定，为供试品。

2. 对照品溶液的制备

精密称取大黄素对照品适量，加甲醇制成每1mL含20mg的溶液。

3. 供试品溶液的制备

取装量差异项下的本品内容物，混匀，取约0.3g，精密称定，加2.5mol/L硫酸溶液20mL，加热回流2小时，放冷，加三氯甲烷30 mL，加热回流1小时，分取三氯甲烷液，酸液继续用三氯甲烷加热回流3次，每次20 mL，每次1小时，合并三氯甲烷液，用水洗涤2次，每次40 mL，取三氯甲烷液蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20mL，注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器于波长254nm处测定大黄素（C₁₅H₁₀O₅)的峰面积，计算出其含量。

中华人民共和国药典，国家药典委员会编，化学工业出版社，2005版，一部，p379。