再造生血片－补骨脂素、异补骨脂素的测定－高效液相色谱法

本方法采用高效液相色谱法测定再造生血片中补骨脂素、异补骨脂素的含量。

本品加甲醇超声处理，放冷，补重，摇匀，滤过，续滤液进入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长247nm处检测补骨脂素、异补骨脂素的吸收值，计算出其含量。

1. 甲醇

2. 乙腈

3. 0.125%磷酸溶液

1 仪器

1.1 高效液相色谱仪

1.2 色谱柱

十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，理论塔板数按补骨脂素计算应不低于3000。

1.3 紫外吸收检测器

2色谱条件

2.1流动相：乙腈 0.125%磷酸溶液＝30 70

2.2检测波长：247nm

2.3柱温：室温

1. 称取供试品

取本品20片，除去包衣，精密称定，研细，取约1g，精密称定，为供试品。

2. 对照品溶液的制备

精密称取补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品适量，加甲醇制成每1mL各含16mg的混合溶液。

3. 供试品溶液的制备

取本品20片，除去包衣，精密称定，研细，取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率25kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液1mL，置10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5mL，注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器于波长247nm处测定补骨脂素（C₁₁H₆O₃)、异补骨脂素（C₁₁H₆O₃)的峰面积，计算出其含量。