方法名称： |
三妙丸－盐酸小檗碱的测定－薄层扫描法 |
应用范围： |
本方法采用薄层扫描法测定三妙丸中盐酸小檗碱的含量。 本方法适用于中成药三妙丸。 |
方法原理： |
供试品于索氏提取器中经乙醚加热回流，过滤，滤液蒸干，残渣用甲醇溶解，制成供试液，点样、展开，用薄层扫描仪进行荧光扫描，于激发波长λ=365nm测量盐酸小檗碱（C20H17NO4·HCl)荧光强度的积分值，计算其含量。 |
试剂： |
1 乙醚 2 甲醇 3 苯 4 醋酸乙酯 5 氨水 6 异丙醇 |
仪器设备： |
1 仪器 1.1索氏提取器 1.2薄层扫描仪 1.3涂布器 应能使吸附剂在玻璃板上手工或自动涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。 1.4点样器 一般采用微升毛细管或与之相应的点样器材。 1.5展开室 可用适合薄层板大小的专用玻璃缸，底部平底或双槽，盖子须密闭。 2 材料 2.1玻板 用10cm×10cm、10cm×15cm、20cm×10cm或20cm×20cm的规格，要求光滑、平整，洗净后不附水珠，晾干。 2.2吸附剂 硅胶G，其颗粒大小一般要求直径为10～40μm。 |
试样制备： |
1.对照品溶液的制备 精密称取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1mL含0.06mg的溶液，作为对照品溶液。 2.供试品溶液的制备 精密称取供试品粉末约 1.5g，置索氏提取器中，加乙醚适量，加热回流 1～2小时，滤去乙醚液，残渣挥去乙醚，加甲醇适量，回流提取至提取液无色，将提取液（必要时适当浓缩)转移至50mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。 注：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。 |
操作步骤： |
1薄层板制备 将吸附剂1份和水3份在研钵中向一方向研磨混合，去除表面的气泡后，倒入涂布器中，在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为0.25～0.5mm)取下涂好薄层的玻板，于室温下，置水平台上晾干，在反射光及透射光下检视，表面应均匀，平整，无麻点、无气泡、无破损及污染，于110℃烘30分钟，冷却后立即使用或置干燥箱中备用，或用商品预制板。 2点样 精密吸取供试品溶液 1μL、对照品溶液 1μL与 3μL，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，如用点样器点样到薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边1.0～1.5cm，样点直径一般不大于2mm，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。 3展开 将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中，以苯－醋酸乙酯－甲醇－异丙醇－浓氨试液（12：6：3：3：1)为展开剂，置用氨蒸气与展开剂同时预饱和15分钟的双槽展开缸内，展开，取出，晾干。 4含量测定 在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，选择反射方式，采用吸收法，进行荧光扫描，激发波长：λ=365nm， 测量供试品荧光强度的积分值与对照品荧光强度的积分值，计算。 用外标法测定时，若对照品各数据点在校正曲线上呈一通过原点的直线时，可用一点法校正，如不通过原点通常宜采用二点法校正，必要时用多点法校正。 |
参考文献： |
中华人民共和国药典，国家药典委员会编、化学工业出版社，2005年版，一部p.325。 |
