复方扶芳藤合剂－黄芪甲苷的测定－薄层扫描法

本方法采用薄层扫描法测定复方扶芳藤合剂中黄芪甲苷的含量。

供试品用氯仿振摇提取，分取上层溶液，用水饱和的正丁醇振摇提取，合并提取液，用氨试液提取，分取正丁醇液，蒸干，残渣加乙醇溶解，通过D₁₀₁型大孔吸附树脂柱，用水洗脱，再用乙醇 洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇溶解，制成供试液，点样、展开，以10%硫酸乙醇溶液显色，用薄层扫描仪进行扫描，于波长λs=530nm， λ_R=700nm测量黄芪甲苷（C₄₁H₆₈O₁₄)吸收度积分值，计算其含量。

1. 氯仿

2 .氨水

3 .甲醇

4 .正丁醇

5 .乙醇

6 .硫酸 10％硫酸乙醇溶液

1 仪器

1.1索氏提取器

1.2薄层扫描仪

1.3涂布器

应能使吸附剂在玻璃板上手工或自动涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。

1.4点样器

一般采用微升毛细管或与之相应的点样器材。

1.5展开室

可用适合薄层板大小的专用玻璃缸，底部平底或双槽，盖子须密闭。

2 材料

2.1玻板

用10cm×10cm、10cm×15cm、20cm×10cm或20cm×20cm的规格，要求光滑、平整，洗净后不附水珠，晾干。

2.2吸附剂

硅胶G，其颗粒大小一般要求直径为10～40μm。

2.3羧甲基纤维素钠

2.4 D101型大孔吸附树脂

1. 对照品溶液的制备

精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每 1mL含 1mg的溶液，作为对照品溶液。

2. 供试品溶液的制备

取供试品 75mL，混匀，精密量取 20mL，用氯仿振摇提取 2次，每次 30mL，分取上层溶液，用水饱和的正丁醇振摇提取 5次，第一次 30mL，其余每次 20mL，合并正丁醇提取液，用氨试液提取 2次 （100mL、 80mL)，分取正丁醇液，蒸干，残渣加 10%乙醇 5mL使溶解，通过D₁₀₁型大孔吸附树脂柱（内径 1.5cm，长 12cm)，用水50mL洗脱，弃去洗脱液，再用 40%乙醇 30mL洗脱，弃去洗脱液，继用70%乙醇50mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至2mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

注：“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

1. 薄层板制备

将吸附剂1份和0.2％羧甲基纤维素钠水溶液3份在研钵中向一方向研磨混合，去除表面的气泡后，倒入涂布器中，在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为0.25～0.5mm)取下涂好薄层的玻板，于室温下，置水平台上晾干，在反射光及透射光下检视，表面应均匀，平整，无麻点、无气泡、无破损及污染，于110℃烘30分钟，冷却后立即使用或置干燥箱中备用，或用商品预制板。

2. 点样

精密吸取供试品溶液 4μL、对照品溶液2μL与6μL，分别交叉点于同一以0.1%羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，如用点样器点样到薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边1.0～1.5cm，样点直径一般不大于2mm，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。

3. 展开

将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中，以〔正丁醇－醋酸乙酯－水（4：1：5)的上层溶液〕－甲醇（10：1)为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，展距16cm以上，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在 100℃加热约 7分钟，至斑点显色清晰，取出。

4. 含量测定

在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，选择反射方式，采用吸收法，进行扫描，波长：λs=530nm， λ_R=700nm， 测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算。

用外标法测定时，若对照品各数据点在校正曲线上呈一通过原点的直线时，可用一点法校正，如不通过原点通常宜采用二点法校正，必要时用多点法校正。

中华人民共和国药典，国家药典委员会编、化学工业出版社，2005年版，一部p.530。