黄连上清丸－盐酸小檗碱的测定－高效液相色谱法

本方法采用高效液相色谱法测定黄连上清丸中盐酸小檗碱的含量。

本方法适用于中成药黄连上清丸。

本品加盐酸-甲醇混合溶液超声处理，放冷，补重，摇匀，滤过，续滤液通过碱性氧化铝柱，以甲醇洗脱，洗脱液加甲醇定容，摇匀，滤过，续滤液进入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长424nm处检测盐酸小檗碱的吸收值，计算出其含量。

1. 盐酸-甲醇（1：100)的混合溶液

2 .甲醇

3 .乙腈

4 .0.033mol/L磷酸二氢钾溶液

1 仪器

1.1 高效液相色谱仪

1.2 色谱柱

十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，理论塔板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于4000。

1.3 紫外吸收检测器

2色谱条件

2.1流动相：乙腈 0.033mol/L磷酸二氢钾溶液＝35 65

2.2检测波长：424nm

2.3柱温：室温

1. 称取供试品

取本品水丸或水蜜丸，研碎，取0.6g，精密称定；或取重量差异项下的大蜜丸，剪碎，取1g，精密称定，为供试品。

2. 对照品溶液的制备

精密称取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每1mL含10mg的溶液。

3. 供试品溶液的制备

供试品，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸-甲醇（1：100)的混合溶液10mL，密塞，称定重量，置50℃水浴中加热15分钟，取出，放冷，超声处理（功率250W，频率33kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，离心，滤过，精密量取上清液2mL，低温挥干，残渣用甲醇适量使溶解并转移至碱性氧化铝柱（100~200目，8g，内径1cm，干法装柱)上，用甲醇.35 mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解并转移至2mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5~10mL，注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器于波长424nm处测定盐酸小檗碱（C₂₀H₁₈ClNO₄)的峰面积，计算出其含量。

中华人民共和国药典，国家药典委员会编，化学工业出版社，2005版，一部，p591。