藿胆丸－猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的测定－薄层扫描法

本方法采用薄层扫描法测定藿胆丸中猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸的含量。

本方法适用于霍胆丸中猪去氧胆酸和鹅去氧胆酸含量的测定。

供试品置电高压灭菌锅内皂化，冷却，滤过，离心，取上清液，用盐酸调节pH值，用氯仿振摇提取，合并氯仿提取液，加无水硫酸钠脱水，滤过，滤液回收氯仿至干，残渣加无水乙醇使溶解，制成供试液，点样、展开，以5％硫酸乙醇溶液显色，用薄层扫描仪进行荧光扫描，于激发波长λ=366 nm测量猪去氧胆酸（C₂₉H₄₀O₄)和鹅去氧胆酸（C₂₄H₄₀O₄)荧光强度的积分值，计算其含量。

1. 乙醚

2 .氢氧化钠

3 .氯仿

4 .无水硫酸钠

5 .无水乙醇

6 .正己烷

7 .醋酸

8 .醋酸乙酯

9 .甲醇

10. 硫酸 5％硫酸乙醇溶液

11 .乙醇

12 .盐酸

1 仪器

1.1电高压灭菌锅

1.2薄层扫描仪

1.3涂布器

应能使吸附剂在玻璃板上手工或自动涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。

1.4点样器

一般采用微升毛细管或与之相应的点样器材。

1.5展开室

可用适合薄层板大小的专用玻璃缸，底部平底或双槽，盖子须密闭。

2 材料

2.1玻板

用10cm×10cm、10cm×15cm、20cm×10cm或20cm×20cm的规格，要求光滑、平整，洗净后不附水珠，晾干。

2.2吸附剂

硅胶G，其颗粒大小一般要求直径为10～40μm。

1. 对照品溶液的制备

精密称取猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸对照品适量，分别加无水乙醇制成每1mL含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。

2. 供试品溶液的制备

精密称取供试品细粉约1g，置锥形瓶中，加入40%氢氧化钠溶液20mL，摇匀，置电高压灭菌锅内，在 120℃皂化 5小时，冷却，滤过，药渣用水洗涤 3次，每次 20mL，离心，取上清液，合并三次离心液，用盐酸调节pH值至约1，用氯仿振摇提取4次（40mL、40mL、30mL、30mL)，合并氯仿提取液，加无水硫酸钠脱水，滤过，用氯仿30mL分次洗涤无水硫酸钠及滤器，洗液并入滤液，回收氯仿至干，残渣加无水乙醇使溶解，置 25mL量瓶中，用适量无水乙醇洗涤容器，洗液并入量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

注：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

1. 薄层板制备

将吸附剂1份和水3份在研钵中向一方向研磨混合，去除表面的气泡后，倒入涂布器中，在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为0.25～0.5mm)取下涂好薄层的玻板，于室温下，置水平台上晾干，在反射光及透射光下检视，表面应均匀，平整，无麻点、无气泡、无破损及污染，于110℃烘30分钟，冷却后立即使用或置干燥箱中备用，或用商品预制板。

2 .点样

精密吸取供试品溶液2μL、上述两种对照品溶液各1μL与4μL，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，如用点样器点样到薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边1.0～1.5cm，样点直径一般不大于2mm，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。

3. 展开

将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中，以正己烷－醋酸乙酯－醋酸－甲醇（20：25：2：3)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％硫酸乙醇溶液，于100℃加热至斑点显色清晰，取出。

4.含量测定

在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，选择反射方式，进行荧光扫描，激发波长：λ=366 nm， 测量供试品荧光强度的积分值与对照品荧光强度的积分值，计算。

用外标法测定时，若对照品各数据点在校正曲线上呈一通过原点的直线时，可用一点法校正，如不通过原点通常宜采用二点法校正，必要时用多点法校正。

中华人民共和国药典，国家药典委员会编、化学工业出版社，2005年版，一部p.663。