新清宁片—大黄素、大黄酚的测定—高效液相色谱法

本方法采用高效液相色谱法测定新清宁片中大黄素、大黄酚的含量。

本方法适用于中成药新清宁片。

本品加甲醇、三氯甲烷加热回流，放冷，补重，摇匀，滤过，续滤液进入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长254nm处检测大黄素、大黄酚的吸收值，计算出其含量。

1.甲醇

2 .乙腈

3 .三氯甲烷

4. 1%磷酸溶液

5 .乙酸乙酯

1 仪器

1.1 高效液相色谱仪

1.2 色谱柱

十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，理论塔板数按大黄素峰计算应不低于3000。

1.3 紫外吸收检测器

2色谱条件

2.1流动相：乙腈 甲醇 1%磷酸溶液＝35 37 28

2.2检测波长：254nm

2.3柱温：室温

1. 称取供试品

取本品20片，除去糖衣，精密称定，研细，取约0.1g，精密称定，为供试品。

2. 对照品溶液的制备

精密称取大黄素对照品和大黄酚对照品适量，分别加甲醇制成每1mL含大黄素20mg、含大黄酚40mg的溶液。

3. 供试品溶液的制备

供试品，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，称定重量，加热回流1.5小时，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25mL，回收甲醇至干，残渣加盐酸溶液（2→27)27mL，加入三氯甲烷20mL，置水浴中加热回流30分钟，立即冷却，移至分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，洗液并入同一分液漏斗中，分取三氯甲烷层，水液用三氯甲烷振摇提取3次（15mL，10 mL，10 mL)，弃去水液，合并三氯甲烷液，以无水硫酸钠适量脱水，回收三氯甲烷至干，残渣加乙酸乙酯2mL使溶解，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

中华人民共和国药典，国家药典委员会编，化学工业出版社，2005版，一部，p647。