决明子-大黄酚的含量测定方法-HPLC1

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方法名称：	决明子-大黄酚的含量测定-HPLC1
应用范围：	用于决明子中大黄酚的含量测定
方法原理：	本品粉末加氯仿-甲醇（1∶1)提取，经液相色谱分离，在254 nm处测定峰面积，外标法计算含量
仪器设备及实验条件：	仪器设备 HP1100高效液相色谱仪，G1311A-四元泵，G1322A-脱气机，G1316A-柱温箱，1314A-UV可变波长检测器，HPRev.A.0501化学工作站色谱条件色谱柱：SUPELC0SIL ^{T m}LC₁₈Column （5 μm，4.6 mm×250 mm) 流动相：甲醇—0.5 %醋酸水溶液（75∶25) 流速：1.0 mL/min 测定波长：254 nm 柱温：40 ℃
试样制备：	对照品溶液制备精密称取大黄酚对照品8.0 mg，置于25 mL容量瓶中，加氯仿-甲醇（1∶1)溶解并稀释至刻度，制成0.32 mg/mL浓度的对照品溶液。供试品溶液制备 1)游离大黄酚样品液：精密称取生、炒决明子粉末（过60目筛)2.5 g，置圆底烧瓶中，加入氯仿-甲醇（1∶1)混合液25 mL，水浴加热（60 ℃)回流1小时，滤过，减压回收溶剂至干。加入氯仿-甲醇（1∶1)混合液溶解，转移至10 mL容量瓶中，稀释至刻度，摇匀静置，用0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。2)总大黄酚样品液：精密称取生、炒决明子粉末（过60目筛)2.5 g，置圆底烧瓶中，加入甲醇25 mL，水浴加热（60 ℃)回流2小时，放至室温，滤过，回收溶剂至干，加入3 %盐酸溶液30 mL，直火水解1 h，放至室温，加入氯仿30 mL，水浴回流15 min，放至室温。用分液漏斗分出氯仿层，用少量蒸馏水分2次洗涤，回收溶剂至干。加入氯仿—甲醇（1∶1)混合液溶解，转移至10 mL容量瓶中，稀释至刻度。精密吸取1 mL，稀释至10 mL，用0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
操作步骤：	分别精密吸取大黄酚对照液以及决明子供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积。以外标法计算大黄酚含量。
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备注：
参考文献：	戚爱棣，阎雪梅，王虹. 液相色谱法测定决明子中大黄酚的含量. 天津中医学院学报. 2002，21（3)：49～50