含黄芩制剂—苦参汤有效部位—黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩

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方法名称：	含黄芩制剂—苦参汤有效部位—黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的含量测定—HPLC-UV
应用范围：	苦参汤有效部位中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的含量测定
方法原理：	本品加50%甲醇超声提取，经液相色谱分离，在280nm处测定峰面积，外标法计算含量
仪器设备及实验条件：	仪器设备 Waters 515高效液相色谱仪；2487紫外检测器，Millennium32软件系统。色谱条件色谱柱： Phenomenex Luna C₁₈柱( 250 mm×4.6 mm，5μm)；流动相：甲醇-磷酸水溶液[磷酸-水(2∶530) ](45∶55)；流速：1.0 mL /min；检测波长：280 nm；柱温：室温。
试样制备：	对照品溶液的制备精密称取黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素对照品4.30、3.70、3.26、3.40mg，分别置50mL量瓶中，加甲醇超声溶解，并稀释至刻度，摇匀，备用。供试品溶液的制备按苦参汤处方单味药比例，称取苦参、黄芩、生地黄一定量，混匀，用稀乙醇回流提取。乙醇提取液减压回收溶剂，残留物加水分散，通过大孔吸附树脂柱，树脂柱水洗去杂后，用稀乙醇洗脱。乙醇洗脱液回收溶剂，残留物减压干燥，得苦参汤有效部位。精密称取苦参汤有效部位2份，每份约5mg，分别置10mL和5mL量瓶中，加50%甲醇超声溶解，并稀释至刻度，摇匀，前者供测定黄芩苷、汉黄芩苷用，后者供测定黄芩素、汉黄芩素用。
操作步骤：	分别精密吸取上述溶液 5～10μL (测定黄芩苷、汉黄芩苷 )和20μL (测定黄芩素、汉黄芩素 ) ，对照品溶液各5μL，注入液相色谱仪，测定色谱峰峰面积，外标一点法计算含量。
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备注：	先按苦参汤处方单味药比例，制备出苦参汤有效部位。
参考文献：	刘斌，石任兵，姜艳艳等.HPLC法测定苦参汤有效部位中4种黄酮类成分含量.北京中医药大学学报.2005.28(6)：59~62