方法名称： |
云南红豆杉枝叶—紫杉醇和三尖杉宁碱的含量测定—HPLC-UV |
应用范围： |
用于云南红豆杉枝叶中紫杉醇和三尖杉宁碱的含量测定 |
方法原理： |
本品粉末用乙酸乙酯:丙酮 (1∶1) 超声提取，浓缩，石油醚脱脂，过氧化铝柱后，经液相色谱仪分离，在227nm处测定，按外标法计算含量。 |
仪器设备及实验条件： |
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仪器设备 Agilent1100高效液相色谱仪；G1314A紫外检测器。 | 色谱条件 色谱柱：Angilent Hypersil ODS2柱 (4.6mm×250mm×5μm)；柱温：30 ℃；流动相：甲醇-乙腈-水 ( 20∶30∶50) ；流量：1.0ml/min；检测波长：227nm；进样量: 10μL。 |
试样制备： |
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对照品溶液的制备 分别精密称取紫杉醇、 三尖杉宁碱对照品适量，各加甲醇制成每毫升约含 0.2 mg的溶液，作为对照品贮备液。 | 供试品溶液的制备 云南红豆杉枝叶自然干燥，粉碎，过60～80目筛，40℃减压干燥至恒重。称取药材约2.00g，精确称定，置磨口具塞三角瓶中，加入乙酸乙酯:丙酮 (1∶1) (30ml×2次 )，25℃ 超声振荡提取40min，滤过，上清液合并，减压蒸干，残渣加入蒸馏水10ml，石油醚 (60～90℃)萃取 ( 10ml×3次 )，石油醚层弃去，水液再用三氯甲烷萃取 (10ml×3次 )，合并各次三氯甲烷萃取液，用适量无水硫酸钠脱水后，减压蒸干，残渣加适量三氯甲烷溶解，加于氧化铝柱 (中性，4 g，内径 0.8 cm)上，用三氯甲烷洗去未被吸附的杂质，再用1%的 CH3OH∶CHCl 3 (V /V )淋洗，最后用5% CH3OH∶CHCl 3 50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇溶解，定容至1ml，甲醇液经 0.45μm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。 |
操作步骤： |
精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，依上述色谱条件测定，按外标法计算含量。 |
附件： |
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备注： |
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参考文献： |
刘莉，罗佳波.云南红豆杉枝叶中紫杉醇和三尖杉宁碱含量的测定.时珍国医国药 .2006，17（5)：754～755 |
