方法名称： |
云南红豆杉枝叶—10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ的含量测定—HPLC-DAD |
应用范围： |
用于云南红豆杉枝叶中10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ的含量测定 |
方法原理： |
本品粉末用超声提取、萃取、过柱等一系列处理后，经液相色谱仪分离，在227nm处测定，按外标法计算含量。 |
仪器设备及实验条件： |
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仪器设备 HP1100型HPLC色谱仪(二极管阵列检测器，蒸发光散射检测器)。 | 色谱条件 色谱柱：C18 (250mm×4.6 mm，5μm )；流动相：甲醇-乙腈-水(5∶35∶6)；检测波长：227 nm ；流速：0.8mL/min；柱温：30℃；进样量：10μL。 |
试样制备： |
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对照品溶液的制备 精密称取10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ对照12.42mg于50mL 量瓶中以甲醇溶解并定容，即得对照品储备液(0.2345mg/ mL )。精密吸取对照品储备溶液 1、2、5、10、20 ml，分别置于25 ml容量瓶中，加甲醇，振摇，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜 (0.45μm) 滤过，依次吸取 10μl进样。以 10-去乙酰巴卡亭 Ⅲ峰面积平均值为纵坐标，10- 去乙酰巴卡亭 Ⅲ 进样量 (μg) 为横坐标，绘制标准曲线：Y = 1351.973X + 1.903，R2= 0.999，表明10-去乙酰巴卡亭 Ⅲ在 0.096～1.947μg范围内的线性关系良好。 | 供试品溶液的制备 取干燥、粉碎、过60目筛后的云南红豆杉药材枝叶10g，用95%乙醇∶乙酸乙酯 ( 90∶10) 150ml超声提取30min，抽滤，提取三次，合并滤液，50℃ 减压回收溶剂至浓膏，加入水∶石油醚 ( 1∶1) 40ml萃取，去石油醚层，再加20ml石油醚萃取水层，多次萃取，直到萃取至石油醚无色，加入二氯甲烷 10 ml萃取水层，萃取多次，合并下层二氯甲烷萃取液，减压蒸干，用少量甲醇溶解，拌少量的硅胶挥干后过硅胶柱，硅胶柱用氯仿湿法装柱，分别用氯仿、氯仿∶甲醇 ( 97∶3)、氯仿：甲醇 (90∶10) 进行梯度洗脱。收集氯仿∶甲醇 (97∶3) 的洗脱液，挥干，用少量甲醇溶解，定容到1ml，微孔滤膜(0.45μm) 滤过，作为供试样品。 |
操作步骤： |
精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，依上述色谱条件测定，按外标法计算含量。 |
附件： |
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备注： |
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参考文献： |
安春志，罗佳波，刘莉等.HPLC 法测定云南红豆杉枝叶中10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ的含量.广州医药.2006，37（5)：47～49 |
