方法名称： |
积雪草总苷元—羟基积雪草酸的含量测定—HPLC-DAD |
应用范围： |
用于50%积雪草总苷元中羟基积雪草酸含量的测定 |
方法原理： |
本品用甲醇溶解，经液相色谱仪分离，在204nm测定峰面积，按标准曲线法计算含量。 |
仪器设备及实验条件： |
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仪器设备 美国Waters公司生产的高效液相色谱系统，配Waters 515型泵、996型二极管阵列检测器；Agilent1100型液质联用仪 (LC-MSD ) 。 | 色谱条件 色谱柱： Agilent Zorbax SB-C18柱( 150mm×4.6 mm，5 μm ) ；保护柱： Shimadzu Shim –packODS；流动相：甲醇-水(体积比为65∶35，含4mmol /L β-CD ，以乙酸调节pH值为4)；流速0.4mL /min；检测波长：204nm；柱温：25℃；进样量：10μL。 |
试样制备： |
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对照品溶液制备 精密称取羟基积雪草酸对照品 10.0 m g,用甲醇配制成10.0 g /L的溶液，然后用甲醇进行倍比稀释，配成质量浓度依次为 5.0，2.0，1.0， 0.5和 0.1g /L的羟基积雪草酸对照品甲醇溶液，以峰面积( y )对质量浓度 ( x，g /L )进行线性回归，羟基积雪草酸的回归方程为 y = 116.54x – 10.058， r2=019989。结果表明。样品量在 0.1～5.0 g /L范围内浓度与峰面积呈线性关系。 | 供试品溶液的制备 精密称取50%积雪草总苷元适量，置于10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，配制成50%积雪草总苷元甲醇溶液5.58 g /L 备用，。进样前用0.45μm 微孔滤膜过滤。 |
操作步骤： |
精密吸取供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以标准曲线法法计算羟基积雪草酸含量。 |
附件： |
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备注： |
采用在甲醇-水流动相中添加β-环糊精的方法分离了羟基积雪草酸和其同分异构体termi-nolic acid,并测定了50%积雪草总苷元中羟基积雪草酸的含量。 |
参考文献： |
潘见，开桂青，袁传勋.β-环糊精流动相添加剂法分离测定积雪草总苷元中的羟基积雪草酸. 色谱.2007，25（3)：316～318 |
