方法名称: |
板蓝根--氨基酸含量测定-- HPLC法 |
应用范围: |
测定板蓝根中氨基酸含量 |
方法原理: |
样品加40%乙醇水溶液超声提取,衍生化后经液相色谱仪分离,以正亮氨酸为内标,在360nm 处测定峰面积,外标法测定氨基酸含量。 |
仪器设备及实验条件: |
仪器设备 大连依利特分析仪器有限公司P200 Ⅱ泵、UV200 型紫外检测器、Echrom 98 色谱数据处理工作站。 |
试样制备: |
标准曲线的制备 分别准确称取精氨酸、脯氨酸和谷氨酸对照品约10 mg,置于10mL量瓶中,用40%乙醇水溶液溶解并稀释至刻度, 摇匀,即得精氨酸、脯氨酸和谷氨酸对照品溶液。准确称取精氨酸、脯氨酸和谷氨酸对照品31.35,33.02 和32.67mg,置于25mL量瓶中,用40%乙醇水溶液溶解并稀释至刻度,摇匀,即得对照品混合溶液。准确吸取对照品混合溶液0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0,3.5,4.0mL,置于10 mL量瓶中,加衍生缓冲液1.0 mL,摇匀,再加衍生溶液1.0 mL,摇匀,避光,于60℃水浴保温1h,放冷,加平衡溶液至刻度,放置15min后分别进样10μL,测得峰面积,以峰面积对进样量做线性回归,即得。 衍生缓冲溶液的制备 称取NaHCO3 平衡溶解的制备 称取KH2PO4 |
操作步骤: |
依上述方法制备供试品溶液,取10μL进样,依法测定,外标法计算含量。 |
附件: |
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备注: |
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参考文献: |
万绍晖,杨浩,耿秀梅.柱前衍生化反相高效液相色谱法测定板蓝根中的氨基酸.色谱.2005,23(4):408-410 |