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您现在的位置: 医学全在线 >> 药学理论 >> 中药及天然药物质量控制研究方法 >> 正文:板蓝根--氨基酸含量测定--HPLC法中药质量控制方法/操作步骤
    

板蓝根--氨基酸含量测定--HPLC法

  
方法名称:
  板蓝根--基酸含量测定-- HPLC法
应用范围:
  测定板蓝根中氨基酸含量
方法原理:
 样品加40%乙醇水溶液超声提取,衍生化后经液相色谱仪分离,以正亮氨酸为内标,在360nm 处测定峰面积,外标法测定氨基酸含量。
仪器设备及实验条件:
 

仪器设备  大连依利特分析仪器有限公司P200 Ⅱ泵、UV200 型紫外检测器、Echrom 98 色谱数据处理工作站。

色谱条件  色谱柱:Sinochrom ODS-BP 柱(250mm×4.6mm, 5μm);流动相:NaAc缓冲溶液(pH 6.4)-乙腈(体积比为85:15);流速:1.0mL/min;检测波长:360nm;进样量:10μL。
试样制备:
 

标准曲线的制备  分别准确称取精氨酸、脯氨酸和谷氨酸对照品约10 mg,置于10mL量瓶中,用40%乙醇水溶液溶解并稀释至刻度, 摇匀,即得精氨酸、脯氨酸和谷氨酸对照品溶液。准确称取精氨酸、脯氨酸和谷氨酸对照品31.3533.02 32.67mg,置于25mL量瓶中,用40%乙醇水溶液溶解并稀释至刻度,摇匀,即得对照品混合溶液。准确吸取对照品混合溶液0.51.01.52.02.53.03.54.0mL,置于10 mL量瓶中,加衍生缓冲液1.0 mL,摇匀,再加衍生溶液1.0 mL,摇匀,避光,于60℃水浴保温1h,放冷,加平衡溶液至刻度,放置15min后分别进样10μL,测得峰面积,以峰面积对进样量做线性回归,即得。

   衍生缓冲溶液的制备  称取NaHCO3 4.2g,加水溶解并定容至100mL,得0.5mol/L NaHCO3溶液(pH9)。

   平衡溶解的制备  称取KH2PO4 3.4g置于500mL量瓶中,加水溶解,加入0.1 mol/LnaOH 145.5mL,用水定容。

供试品溶液的制备  取板蓝根粉末(40 目) 约0.5g,准确称定,加40%乙醇水溶液40mL后超声提取30min,过滤,滤渣连同滤纸以40%乙醇15mL分3次洗涤,合并于滤液中,蒸干;残渣用40%乙醇水溶液溶解并定容至10mL量瓶中。准确量取1mL置于10mL量瓶中,加衍生缓冲液1.0mL,摇匀;再加衍生溶液1.0mL,避光下于60℃恒温水浴中衍生1h,取出放冷,加平衡溶液稀释至刻度,摇匀,放置15min,即得。
操作步骤:
   依上述方法制备供试品溶液,取10μL进样,依法测定,外标法计算含量。
附件:
  点击下载 (解压密码:www.lindalemus.com)
备注:
 
参考文献:
  万绍晖,杨浩,耿秀梅.柱前衍生化反相高效液相色谱法测定板蓝根中的氨基酸.色谱.2005,23(4):408-410
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