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您现在的位置: 医学全在线 >> 药学理论 >> 中药及天然药物质量控制研究方法 >> 正文:罗汉果—罗汉果甙ⅡE,Ⅲ,Ⅴ的测定方法—HPLC中药质量控制方法/操作步骤
    

罗汉果—罗汉果甙ⅡE,Ⅲ,Ⅴ的测定方法—HPLC

  
方法名称:
  罗汉果—罗汉果甙ⅡE,Ⅲ,Ⅴ的测定— HPLC
应用范围:
  本方法适用于罗汉果中罗汉果甙ⅡE,Ⅲ,Ⅴ含量的测定
方法原理:
 本品粉末加甲醇回流提取,经液相色谱分离,在203 nm处测定峰面积,外标法计算含量
仪器设备及实验条件:
 

仪器    Agilent-1100分析型高效液相色谱仪,包括二极管阵列多波长检测器DAD、四元梯度泵、空脱气机、7725i 动进样器、HP化学工作站(美国Agilent公司)

试剂    罗汉果甙ⅡE、Ⅲ和甙Ⅴ对照品(本实验室自制,TLCRf值、IRNMR值均与文献报道一致,液相色谱峰为单峰,纯度分别达到98.1 %98.5 %98.2 %)

色谱条件    色谱柱:ZORBAX SB-C18柱( 4. 6 mm ×150 mm,5 μm);流动相:乙腈—水(体积比25∶75);流速:1 mL/min;检测波长:203 nm;柱温:25 ℃;进样量:20 μL
试样制备:
 

对照品溶液制备    分别精密称取罗汉果甙ⅡEV对照品各50 mg,置于50 mL容量瓶中,用流动相乙腈水(体积比25 ∶75)溶液超声溶解,用时适当稀释。

    供试品溶液的制备    选取不同时期的新鲜罗汉果适量,破碎、冷冻干燥36 h,碾碎过40目筛,精密称取1 g样品,用20 mL甲醇溶解回流提取3 次(2、1、1 h),过滤,合并滤液回收溶剂至干,多次总量加入约20 mL水超声溶解,溶液过HPD-200大孔吸附树脂,然后用蒸馏水洗至流出液无色,并以80 %乙醇溶液60 mL洗脱,收集洗脱液,旋转蒸发至干,以流动相乙腈—水(体积比25∶75) 溶液少量多次的超声溶解,并定容至25 mL容量瓶中,用0. 45 μm微孔滤膜过滤,滤液作为供试品备用。
操作步骤:
  分别精密吸取罗汉果甙ⅡE,Ⅲ,Ⅴ对照液以及罗汉果供试品溶液各20 μL,注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定峰面积。以外标法计算罗汉果甙ⅡE,Ⅲ,Ⅴ含量。
附件:
  点击下载 (解压密码:www.lindalemus.com)
备注:
 
参考文献:
  刘磊等. HPLC法测定不同生长期罗汉果甙ⅡE,Ⅲ,Ⅴ的含量. 广西植物 .2007,27(4):665~668
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