广西苦丁茶嫩叶和老叶中—槲皮素和山柰素的含量测定方法—HPLC

仪器   Waters液相色谱仪（Waters600泵，7725 i六通阀，996二极管阵列检测器，Millennium32 数据处理系统)

色谱条件  色谱柱：Waters公司N0va—Pak C18柱（3. 9 mm×300 mm，4μm) ；流动相：甲醇—0. 4 %磷酸溶液（50∶50)；流速：0. 7 mL/min；检测波长：360 nm；柱温：40 ℃；

对照品溶液制备  精密称取槲皮素对照品8. 12 mg和山柰素对照品8. 34 mg分别置50 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度再稀释2. 5倍，即得对照品溶液。

供试品溶液制备 　（1)用甲醇提取　将苦丁茶嫩叶和老叶分别剪碎后，称取样品20 g，加甲醇200 mL，水浴回流1. 5 h，过滤，残渣再加甲醇100 mL，回流1 h，合并滤液，用甲醇定容至250 mL量瓶中，得苦丁茶甲醇提取液。（2)用乙醇提取  称取已剪碎的苦丁茶叶20 g，加体积分数为70 %乙醇200 mL，水浴回流1. 5 h，过滤，残渣再加体积分数为70 %乙醇100 mL，回流1 h；合并滤液，用体积分数为70 %乙醇定容至250 mL量瓶中，得苦丁茶乙醇提取液。（3)用水提取　称取已剪碎的苦丁茶叶20 g，加200 mL的水煮提取1. 5 h，过滤，残渣再加水100 mL煮1 h；合并滤液浓缩至50 mL，再加体积分数为95 %乙醇140 mL搅匀使沉淀，静置24 h，抽滤，滤渣用体积分数为80 %乙醇洗涤，滤液合并置于250 mL量瓶中，用体积分数为80 %乙醇定容至刻度，摇匀，即得苦丁茶水提取液。