苦丁茶老叶—熊果酸的含量测定方法—HPLC

仪器   Waters 600 型四元液相色谱泵，Waters996型光电二极管阵列检测器，WatersM32色谱工作站，1 mL 0ASISR HLB Cartridge固相萃取小柱（WATERS公司)

色谱条件  色谱柱：N0va—Pak C18 （3.9 mm×150 mm，4.0 μm)；流动相：甲醇—水—磷酸（体积比85∶15∶0.1)；检测波长：220 nm；流速：0.8 mL/min；柱温：30 ℃

对照品溶液制备  　精密称取熊果酸对照品8.34 mg，置10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，得浓度为0.834 mg/mL的对照品溶液，用时稀释适当倍数，即得。

供试品溶液制备　  称取约10 g苦丁茶老叶，剪碎，加入80 %（体积分数)乙醇溶液160 mL，于85 ℃水浴回流提取2次，每次2.5 h；合并提取液，滤过，滤液于85 ℃水浴挥干，残渣以甲醇溶解并定容至10 mL，以0.45 μm微孔滤膜滤过，弃去初滤液，取续滤液1.0 mL移入经活化的固相萃取小柱，以重整水2 mL、30 %甲醇2 mL依次以3滴/s的速度进行洗脱，最后用80 %甲醇2 mL以3滴/s的速度进行洗脱，收集末次洗脱液，即得供试品溶液。