天花粉蛋白

    1.致流产和抗早孕作用
用天花粉蛋白粗制剂,给孕期10～20d小鼠每只皮下注射0.2mg,五d后解剖,记录胎仔总数及死仔数(包括吸收点)计算有效率在75%以上,给5只孕期30d以上的犬肌注0.5mg/kg,能命名胎犬死亡并娩出,给孕期14d左右的每只兔肌注4mg或阴道内给药32mg,5～7d后剖腹检查,也有致流产作用,体外培养试验,对孕期5d的兔胚泡有损伤作用:注射于早孕兔亦有明显明显抗早孕效果,可使胚泡坏死、液化,终致完全吸收。
经I-天花粉粗提物在孕妇体内的分布与排泄试验,间接荧光标记抗体法追踪妊娠小鼠体内不同时间的天花粉蛋白抗原分布动态,猕猴及人流产胎盘的病理学观察和临床病理现象分析,天花粉蛋白对体外培养人胎盘绒毛滋养层细胞形态和功能损伤的观察,天花粉蛋白引产前后血清内绒毛膜种性腺激素(双抗体免疫法)及尿中孕二醇、雌三醇(气相层析法)的含量测定,以及抑制内源前列腺合成对天花粉蛋白引产的影响等方面的研究结果,互相验证,可对天花粉蛋白的致流产作用原理归纳如下:天花粉蛋白直接作用于胎盘滋养层细胞,并有一定的细胞专一性;能选择地使胎盘绒毛合体滋养层细胞变性坏死,解体的细胞碎片留在血窦中引起凝血,造成循环障碍和进一步的大量组织坏死:胎盘绒毛的损伤反映在功能方面,即绒毛膜促性腺激素和类固醇激素迅速下降到先兆流产的临界水平以下,由于胎盘形态和功能严重损伤的结果,破坏了母体和胎儿之间的内分泌联系的代谢物的交换,使胎儿死亡,并假定可能通过尚未清楚的机制引起前列腺素合成增加,发动宫缩而导致流产。天花粉蛋白能使小鼠离体子宫、兔在体子宫及慢性子宫瘘管收缩增强,并能提高子宫对垂体后叶素的敏感性,故认为其对子宫平滑肌有直接兴奋作用,可能也是导致流产的因素之一。注射用天花粉能促进妊娠后期大鼠娩出胎鼠并增强其在位子宫的自发活动。该药物提高妊娠大鼠子宫PGF2α含量,对动物血浆和子宫孕酮浓度则无明显影响,可见该药促进子宫PGF2。合成和释放是增强妊娠子宫自发活动的重要原因。
2.免疫学影响
(1)对肥大细胞脱颗粒和组胺释放的影响
首先用Alcian蓝染色的肥大细胞脱颗粒试验和用荧光测定组胺的方法观察了天花粉蛋白对肥大细胞脱颗粒和组胺释放的影响。结果表明:①在体外试验中,不论有无血清的存在,天花粉蛋白都不引起肥大细胞的脱粒和组胺释放。②天花粉蛋白的体内用药,能引起Balb/c小鼠炎症局部的肥大细胞脱颗粒和组胺水平的明显提高。③腹膜腔内注射天花粉蛋白后,WISTATR大鼠腹膜腔内蛋白明显渗出,同时全血组胺水平也明显提高。④上述天花粉蛋白诱导的腹腔渗出液具有明显的肥大细胞脱颗粒作用,⑤用眼镜蛇毒素完全耗竭小鼠的补体对天花粉蛋白引起的肥大细胞脱粒因子的产生无明显影响,可见,天花粉蛋白的体内应用能通过激活某些可溶性成分的产生而引起肥大细胞的脱颗粒和组胺的释放,但这一过程与天花粉蛋白激活补体的作用无明显关系。
(2)对激肽系统的激活作用
天花粉蛋白对激肽系统有激活作用,实验组激肽释放酶活力单位为190±14mμ/ml,对照组为149±14mμ/ml,P<0.01;天花粉蛋白裂解片段CBTf1同样可以激活激肽系统,而CBTf2对激肽系统无影响。天花粉蛋白引起临床过敏反应及类过敏反应可能与激肽系统的激活有关。
(3)诱发人体免疫抑制的遗传控制
去除CD8阳性细胞或作相应单抗的封阻,可使天花粉蛋白体外诱发的免疫低反应得到回复,然而这一现象仅见于一部分受试者,对其余受试者清除或封阻CD8细胞后低反应保持不变甚至略有加剧,正常人因而区分为cd8介导型(M+)及非介导型(M－)两类个体。进一步研究表明:①M+和M-是可重复的稳定性状。②这一区分仅见于同种异体免疫应答而非PHA诱发的细胞增殖。③只有MLR反应,细胞一方去除CD细胞方能显示上述差异与刺激细胞遗传背景及是否带有CD8细胞无关。④天花粉蛋白致敏细胞作短期培养,仅M+个体上清液显示免疫抑制活性。
根据CD8阴性细胞在天花粉蛋白作用下是否表达抑制功能,将68名随机正常人区分为21名CD8介导型个体(M+)和47名非介导型个体(M一),介导系数均值分别为13.4和-5.6。根据群体中介导系数变异的双峰性分布,推断M+的M-所显示的免疫学特征属于单基因控制的遗传性状,相应等位基因频率分别为0.1686和0.8314。由于M-在天花粉蛋白作用下不显示CD8参与的免疫低反应性,该类个体免疫应答强度应高于 M+,经测定,两者相对反应值相差12.5%～12.7%。
3.抗癌作用
临床证实,天花粉蛋白对胎盘滋养叶细胞肿瘤有一定疗效。腹腔注射5mg/kg,对小鼠实验性肝癌腹水型也有一定治疗作用,可减少腹水量,延长存活期;对移植性肝癌实体瘤也有轻度抑制作用。精制天花粉蛋白和结晶天花粉蛋白对离体绒癌细胞增殖有抑制作用,其中精制天花粉蛋白的IC50 为16.0μg/ml,结晶天花粉蛋白IC50 为3.3μg/ml。
4.体内过程
据I-天花粉粗提物在孕妇或猕猴体内的分布与排泄、间接荧光标记抗体法或整放射自显影法追踪妊娠小鼠体内不同时间的天花粉蛋白抗原或I标记的天花粉蛋白分布动态,放射免疫法测定孕妇血清或孕猴体内天花粉蛋白抗原成分的分布,以及恶性葡萄胎患者静脉滴注I-天花粉粗提物等试验结果,揭示天花粉蛋白肌注后10min即在血清中出现,4h后局部存留量约为给药量的3/5,24h后只有给药量的3/10左右。肌注1h后以肾皮质和肠内粪便含量为最高,其次为胎盘组织,而肝、脾、肺中含量较低,超过16h则表现为游离碘的分布特点。子宫肌、胎儿肝组织及红血球亦均含有天花粉蛋白,但羊水内并无渗入。血清中天花粉蛋白于肌注后4h达高峰,此时血循环中出现的瞬时最大总量近似于肌注量的5%,第8h已递减一半,第24h仅有高峰量的1/7。肌注16h后,除肾皮质外,其他组织中含量均已很少。经尿排泄的高峰出现时间与血高峰浓度出现时间基本一致,且未被降解。静脉内给药后,在血循环中消失一半所需的时间约为1h。先是肝脏浓度很高,而后肾脏与胆汁中含量上升。24h内经尿总排出率可达67%。羊膜腔内注射时,母体血清中检测不出天花粉蛋白,经尿排出量甚少,大多保留在腔内,直到流产时才随羊水排出体个,流产后测定羊水、羊膜、平滑绒毛和胎盘中I标记的天花粉蛋白,随解剖学位置由内向外含量逐渐降低,且胎儿血清中也含有一定量以上材料说明,天花粉蛋白肌注容易吸收;经静脉给药,开始集中在肝脏,而后经肾脏和胆汁排泄,药物及其代谢产物从体内清除较为迅速。羊膜腔内给药,天花粉蛋白只能缓慢地透过羊膜和胎盘屏障,进入母体血循环的量甚小,故全身副反应也比静脉给药及肌注为轻。虽然天花粉蛋白对细胞的结合专一性并不很强,但无论静脉给药、肌注及羊膜腔内注射,其在胎盘上均有一定的选择性积累,且能迅速进入胎儿组织。

不同纯度的天花粉蛋白制剂,毒性及副作用在质的方面基本一致,但在程度上有轻重不同。大体是纯度愈高,其他毒蛋白含量愈少,其蛋白反应愈轻。 (1)过敏反应 小鼠或豚鼠经天花粉蛋白致敏后,再决定注射量,小鼠均呈过敏反应甚至死亡,豚鼠全部死亡。 (2)一般毒性试验 成年雌25只肌注不同剂量的天花粉蛋白粗制剂,0.2～2.0mg/kg组可出现精神萎糜、食欲减退以至拒食,经2～6d逐渐恢复。肾功能非蛋白氮无明显变化,少部分犬肝功能谷丙转氨酶轻度升高,并出现全射毛细血管和小静脉扩张瘀血,肝、肾实质细胞轻度变性。在3～4mg/kg组,大部分犬经1～2周后严重衰竭而死亡。心电图ST段随病程逐步降低,T波明显倒置,个别出现多发性早搏现象。非蛋白氮急剧升高,可达200mg%左右,同时有血钠、血氯下降,血钾升高,二氧化碳结合力降低,呈代谢酸中毒。谷丙转氨酶升高较低剂量组尤为显著。除有与低剂量组相同的病理变化外,出现多种脏器(包括肾上腺皮质)出血点,以及肾脏近曲小管大片坏死,有的出现肝实质细胞小灶性坏死。两组动物用药后均有白细胞总数升高,可达3～4万/mm3,嗜中性白细胞百分率可增加到90%,一般经一周左右降至正常。脑电图观察可见天花粉蛋白对中枢神经有中等度抑制现象,给兔、猴肌注或静注后均出现类似戊巴比妥钠引起的病理性慢波。家股四头肌局部刺激试验,结果局部有程度不等的充血及点状出血,但无坏死现象。 (3)小鼠亚急性LD50的测定,皮下注射,观察10d,结果为单纯大花粉2.26mg/只,结晶天花粉蛋白0.236mg/只。

用于中期妊娠流产;用于抗早孕;用于过期流产及死胎;用于宫外孕;用于葡萄胎; 用于恶性葡萄胎、绒毛膜上皮癌。

天花粉蛋白有较强的抗原性,检测有接触史者的血清抗体或作皮试,多数呈阳性反应,甚至有个别医务人员因接触天花粉蛋白引起严重过敏者。测定188例于1年～6年前曾用天花粉蛋白流产者的血清抗体,显示其在6年内仍继续存在,效果亦未见有逐年降低的趋势,且肌内给药的血清抗体效价明显高于羊膜腔内给药者。故应用前必须先用0.1mcg作皮试,而后还须肌注0.2mg观察2h作试探性给药,这些步骤对预防天花粉蛋白过敏反应的发生,具有重要意义,鉴于有皮试阴性应用天花粉蛋白发生过敏的,故有人建议有应用史者最好不再用。 天花粉蛋白常见的副反应有发热、头痛、皮疹、咽喉痛、颈项活动不利等。在发热的同时,白细胞总数升高到1000/mm3以上,嗜中性白细胞百分比可增加到90%以上。若为肌注,可致局部红肿疼痛、注射则腹股沟淋巴结肿大并伴有压痛。这些全身和局部反应一般在数天至一周内均可逐步自行消退。加用长效促皮素激素或肾上腺皮质激素,可减轻这些副反应,并可选用解热镇痛药和抗组织胺药作对症处理。 天花粉蛋白偶见的不良反应有神经血管性水肿、病理性心电图或心率异常、血压下降、鼻出血或流产前后出血过多、肝脾肿大、腹涨、蛋白尿等。虽经常规处理均可逐步缓解,但应注意预防,特别是对血凝机制障碍和出血倾向尤应警惕。据临床材料,鼻血不止和流产前后大出血的发生率分别为1%和1.7%左右。检测这些病例,往往可见血中纤维蛋白原降低和胎盘大量纤维蛋白沉着。因此认为上述异常出血可能与血中纤维蛋白原沉着有关,甚至有引起血管内凝血和继发性纤溶的可能。故应测定患者的纤维蛋白原、血小板、出凝血时间等血凝数据,以防止发生大出血。 曾有报道天花粉蛋白引起过敏性休克数例和肱动脉血栓1例,并可能出现其他严重反应,如急性肺水肿、脑水肿、脑组织出血和心肌损害等。医务人员应掌握救治措施,必要时可采用冬眠疗法进行抢救。 应用天花粉蛋白作中期妊娠流产者,进行远期安全性观察,可见对妇女的月经、健康和劳动的影响极小,也不影响再次生育功能;但早产发生率为9.39%,较未曾用过天花粉蛋白者的早产率5.98%为高。 天花粉蛋白的禁忌症如下: 皮试阳性(包括再次用药前的皮试阳性)、过敏体质及活动性心、肝、肾疾病或功能不良者、出血性疾病、严重贫血、精神异常、智力障碍及有应用史者慎用。急性炎症患者应根据情况暂缓应用。由于天花粉蛋白有较强的抗原性,且对少数患者可致严重的不良反应,目前除对滋养层细胞瘤仍在继续试用外,在其他方面已趋向少用或不用。

1.《中药有效成分药理与应用》