| 公开(公告)号 | CN1923208A |
| 公开(公告)日 | 2007.03.07 |
| 申请(专利)号 | CN200510017086.X |
| 申请日期 | 2005.08.29 |
| 专利名称 | 毛形属线虫免疫核糖核酸制备方法及医用用途 |
| 主分类号 | A61K31/70(2006.01)I |
| 分类号 | A61K31/70(2006.01)I;A61K31/7088(2006.01)I;A61K35/12(2006.01)I;C07H21/00(2006.01)I;A61P37/04(2006.01)I;A61P35/00(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 张西臣 |
| 发明(设计)人 | 张西臣;李建华 |
| 地址 | 130062吉林省长春市西安大路175号军需大学 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 吉林长春新纪元专利代理有限责任公司 |
| 代理人 | 陈宏伟 |
| 国省代码 | 吉林;22 |
| 主权项 | 一种毛形属线虫免疫核糖核酸制备方法，包括以下步骤： 1)毛形属线虫免疫核糖核酸制备 (1)、动物免疫： 将旋毛形线虫免疫一岁龄羊或马、猪、牛等动物，检查无传染病后加福氏佐剂制成乳化的油包水状，于淋巴结内每只注射1ml，12-14天处死，取肝、脾、心、肺和肾等，进行免疫核糖核酸提取； (2)免疫核糖核酸提取 ①采用肝脏免疫核糖核酸制备方法：将羊或马、猪、牛等动物肝用生理盐水洗净，切成小块，加入1-2倍体积0.1mol/L氯化钠，0.05mol/L枸橼酸三钠Triton-100，用组织捣碎机制成匀浆，离心3500r/min 20min，得离心上清液；取上清液加入等体积0.2mol/L三乙醇胺、10g/L十二烷基硫酸钠、0.002mol/L乙二胺四乙酸二钠，搅拌均匀后，加等体积90％苯酚、等体积氯仿，于室温下震荡30min，离心3500r/min，20min，得提取物上清液，再加入等量氯仿振摇，反复2-3次，至中间层界面无明显蛋白层为止，离心除去蛋白，收集上清液；将上清液加入1/10体积200g/L乙酸钾和2倍体积-20℃的无水乙醇于0℃放置1小时，离心，得白色沉淀；将沉淀溶解于含有0.001mol/L乙二胺四乙酸二钠、0.01mol/L乙酸钠溶液中，加等体积2.5mol/L磷酸氢二钾，于不断搅拌下再加等体积的乙二醇甲醚，0℃放置30min，离心，得上清液；将上清液在0℃不断搅拌下，加入等体积0.2mol/L乙酸钠液和1/4体积10g/L溴化十六烷基三甲基铵，0℃放置30min，离心取沉淀，用0.1mol/L乙酸钠液、70％乙醇反复洗涤5次，至无泡沫为止；沉淀溶解于0.001mol/L乙二胺四乙酸二钠，除菌过滤，测定含量，无菌灌装，冷冻干燥，即得免疫核糖核酸制品； ②采用脾制备免疫核糖核酸 将免疫动物马或羊、猪、牛等动物的脾脏去除脂肪组织，称重，剪碎，加入用等量含5g/L十二烷基硫酸钠、0.14mol/L氯化钠，0.2％吐温-80和1g/L皂土的0.01mol/L乙酸缓冲液，置组织捣碎机中制成匀浆，以3000r/min离心分离，上清液加等体积含5g/L十二烷基硫酸钠，0.14mol/L氯化钠和0.001mol/L乙二胺四乙酸二钠的0.01mol/L的乙酸缓冲液，搅拌15min，加等体积的80％苯酚搅拌10min，以3000r/min离心20min，吸取上层水相，加1/2体积用上述乙酸缓冲液配成的90％苯酚，搅拌5min，离心3000r/min、20min；吸取上层水相，加入氯化钠至0.1mol/L，在搅拌下加入2.5倍体积预冷至-20℃的95％乙醇，于-10℃以下冷库沉淀，离心2000r/min、10min；收集沉淀物溶于适量的0.14mol/L氯化钠溶液中，加入等体积氯仿，振摇10min，离心3000r/min、15min；吸取水相，搅拌下加入2.5倍体积，冷至-20℃的95％乙醇洗涤，离心2000r/min、共10min，6号垂熔漏斗过滤，无菌分装冷冻干燥，即获得脾免疫核糖核酸制剂。 |
| 摘要 | 本发明公开一种毛形属线虫免疫核糖核酸制备方法，将旋毛形线虫免疫一岁龄羊或马、猪、牛等动物，检查无传染病后加福氏佐剂制成乳化的油包水状，于淋巴结内每只注射1ml，12-14天处死，取肝、脾、心、肺和肾等，进行免疫核糖核酸提取。本发明还公开了毛形属线虫免疫核糖核酸在防治人和动物免疫功能低下引进疾病的医用用途，同时提供了相应的药物制剂。主要用于肿瘤病、早期癌症、性功能低下和病毒病等免疫功能低下或缺陷引起的疾病的预防和治疗，兼有保健功能。毛形属线虫免疫核糖核酸医疗效果好，制剂安全、作用范围广，适用于工业化制备，生产成本低。 |
| 国际公布 |
