| 公开(公告)号 | CN1320118C |
| 公开(公告)日 | 2007.06.06 |
| 申请(专利)号 | CN200410073165.8 |
| 申请日期 | 2004.10.11 |
| 专利名称 | 人骨形成蛋白-4成熟肽的大肠杆菌高表达载体和制备方法 |
| 主分类号 | C12N15/70(2006.01)I |
| 分类号 | C12N15/70(2006.01)I;C12N15/12(2006.01)I;C12P21/02(2006.01)I;C07K1/14(2006.01)I;A61P19/00(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 中国人民解放军第四军医大学 |
| 发明(设计)人 | 陈苏民;秦 云;陈南春 |
| 地址 | 710049陕西省西安市长乐西路15号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 西安通大专利代理有限责任公司 |
| 代理人 | 孙 枫 |
| 国省代码 | 陕西;61 |
| 主权项 | 一种人骨形成蛋白-4成熟肽的大肠杆菌表达载体，其特征在于：所述的人骨形成蛋白-4成熟肽的大肠杆菌表达载体是指用分子克隆技术将从人体组织cDNA文库中扩增得到人骨形成蛋白-4成熟肽的cDNA序列，再克隆重组获得的大肠杆菌表达载体pDH2-hB4m，该载体能够在大肠杆菌中高水平表达出人骨形成蛋白-4成熟肽，载体DNA全长4，014个核苷酸对，全部核苷酸序列如下： 1 AGATCTCTCT CACCTACCAA ACAATGCCCC CCTGCAAAAA ATAAATTCAT ATAAAAAACA TCTAGAGAGA GTGGATGGTT TGTTACGGGG GGACGTTTTT TATTTAAGTA TATTTTTTGT 61 TACAGATAAC CATCTGCGGT GATAAATTAT CTCTGGCGGT GTTGACATAA ATACCACTGG ATGTCTATTG GTAGACGCCA CTATTTAATA GAGACCGCCA CAACTGTATT TATGGTGACC 121 CGGTGATACT GAGCACATCA GCAGGACGCA CTGACCACCA TGAAGGTGAC GCTCTTAAAA GCCACTATGA CTCGTGTAGT CGTCCTGCGT GACTGGTGGT ACTTCCACTG CGAGAATTTT 181 ATTAAGCCCT GAAGAAGGGC AGCATTCAAA GCAGAAGGCT TTGGGGTGTG TGATACGAAA TAATTCGGGA CTTCTTCCCG TCGTAAGTTT CGTCTTCCGA AACCCCACAC ACTATGCTTT 241 CGAAGCATTG GTTAAAAATT AAGGAGAATT CATGAAGCAT CACTCACAGC GGGCCAGGAA GCTTCGTAAC CAATTTTTAA TTCCTCTTAA GTACTTCGTA GTGAGTGTCG CCCGGTCCTT 301 GAAGAATAAG AACTGCCGGC GCCACTCGCT CTATGTGGAC TTCAGCGATG TGGGCTGGAA CTTCTTATTC TTGACGGCCG CGGTGAGCGA GATACACCTG AAGTCGCTAC ACCCGACCTT 361 TGACTGGATT GTGGCCCCAC CAGGCTACCA GGCCTTCTAC TGCCATGGGG ACTGCCCCTT ACTGACCTAA CACCGGGGTG GTCCGATGGT CCGGAAGATG ACGGTACCCC TGACGGGGAA 421 TCCACTGGCT GACCACCTCA ACTCAACCAA CCATGCCATT GTGCAGACCC TGGTCAATTC AGGTGACCGA CTGGTGGAGT TGAGTTGGTT GGTACGGTAA CACGTCTGGG ACCAGTTAAG 481 TGTCAATTCC AGTATCCCCA AAGCCTGTTG TGTGCCCACT GAACTGAGTG CCATCTCCAT ACAGTTAAGG TCATAGGGGT TTCGGACAAC ACACGGGTGA CTTGACTCAC GGTAGAGGTA 541 GCTGTACCTG GATGAGTATG ATAAGGTGGT ACTGAAAAAT TATCAGGAGA TGGTAGTAGA CGACATGGAC CTACTCATAC TATTCCACCA TGACTTTTTA ATAGTCCTCT ACCATCATCT 601 GGGATGTGGG TGCCGCTGAT AATCTAGAGT CGACCTGCAG GCATGCAAGC TTCTGTTTTG CCCTACACCC ACGGCGACTA TTAGATCTCA GCTGGACGTC CGTACGTTCG AAGACAAAAC 661 GCGGATGAGA GAAGATTTTC AGCCTGATAC AGCTTAAATC AGAACGCAGA AGCGGTCTGA CGCCTACTCT CTTCTAAAAG TCGGACTATG TCGAATTTAG TCTTGCGTCT TCGCCAGACT 721 TAAAACAGAA TTTGCCTCCC GGCAGTAGCG CGGTGGTCCC ACCTGACCCC ATGCCGAACT ATTTTGTCTT AAACGGAGGG CCGTCATCGC GCCACCAGGG TGGACTGGGG TACGGCTTGA 781 CAGAAGTGAA ACGCCGTAGC GCCGATGGTA GTGTGGGGTC TCCCCATGCG AGAGTAGCCA GTCTTCACTT TGCGGCATCG CGGCTACCAT CACACCCCAG AGGGGTACGC TCTCATCGGT 841 ACTGCCAGGC ATCAAATAAA ACGAAAGGCT CAGTCGAAAG ACTGGGCCTT TCGTTTTATC TGACGGTCCG TAGTTTATTT TGCTTTCCGA GTCAGCTTTC TGACCCGGAA AGCAAAATAG 901 TGTTGTTTGT CGGTGAACGC TCTCCTGAGT AGGACAAATC CGCCGGGAGC GGATTTGAAC ACAACAAACA GCCACTTGCG AGAGGACTCA TCCTGTTTAG GCGGCCCTCG CCTAAACTTG 961 GTTGCGAAGC AACGGCCCGG AGGGTGGCGG GCAGGACGCC CGCCATAAAC TGCCAGGCAT CAACGCTTCG TTGCCGGGCC TCCCACCGCC CGTCCTGCGG GCGGTATTTG ACGGTCCGTA 1021 CAAATTAAGC AGAAGGCCAT CCTGACGGAT GGCCTTTTTG CGTTTCTACA AACTCTTTGT GTTTAATTCG TCTTCCGGTA GGACTGCCTA CCGGAAAAAC GCAAAGATGT TTGAGAAACA 1081 TTATTTTTCT AAATACATTC AAATATGTAT CCGCTCATGA GACAATAACC CTGATAAATG AATAAAAAGA TTTATGTAAG TTTATACATA GGCGAGTACT CTGTTATTGG GACTATTTAC 1141 CTTCAATAAT ATTGAAAAAG GAAGAGTATG AGTATTCAAC ATTTCCGTGT CGCCCTTATT GAAGTTATTA TAACTTTTTC CTTCTCATAC TCATAAGTTG TAAAGGCACA GCGGGAATAA 1201 CCCTTTTTTG CGGCATTTTG CCTTCCTGTT TTTGCTCACC CAGAAACGCT GGTGAAAGTA GGGAAAAAAC GCCGTAAAAC GGAAGGACAA AAACGAGTGG GTCTTTGCGA CCACTTTCAT 1261 AAAGATGCTG AAGATCAGTT GGGTGCACGA GTGGGTTACA TCGAACTGGA TCTCAACAGC TTTCTACGAC TTCTAGTCAA CCCACGTGCT CACCCAATGT AGCTTGACCT AGAGTTGTCG 1321 GGTAAGATCC TTGAGAGTTT TCGCCCCGAA GAACGTTTTC CAATGATGAG CACTTTTAAA CCATTCTAGG AACTCTCAAA AGCGGGGCTT CTTGCAAAAG GTTACTACTC GTGAAAATTT 1381 GTTCTGCTAT GTGGCGCGGT ATTATCCCGT ATTGACGCCG GGCAAGAGCA ACTCGGTCGC CAAGACGATA CACCGCGCCA TAATAGGGCA TAACTGCGGC CCGTTCTCGT TGAGCCAGCG 1441 CGCATACACT ATTCTCAGAA TGACTTGGTT GAGTACTCAC CAGTCACAGA AAAGCATCTT GCGTATGTGA TAAGAGTCTT ACTGAACCAA CTCATGAGTG GTCAGTGTCT TTTCGTAGAA 150 |
| 摘要 | 本发明涉及人骨形成蛋白-4成熟肽的大肠杆菌表达载体及其所表达的人骨形成蛋白-4成熟肽的制备方法。所述的载体是指用分子克隆技术重组获得的大肠杆菌表达载体pDH2-hB4m，载体全长4,014个核苷酸对；所述利用表达载体pDH2-hB4m制备具有生物学活性人骨形成蛋白-4成熟肽的方法，包括宿主菌转化表达、培养、纯化、复性、活性鉴定步骤。本发明所提供的大肠杆菌高表达载体和用该载体转化宿主菌表达人骨形成蛋白-4成熟肽的制备方法，可以作为新的基因工程产品及其方法推向临床治疗、诊断和科学研究应用，并推向市场。 |
| 国际公布 |
