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重组嵌合分子Cb1-Grb7(SH2)-RING真核表达质粒及抗肿瘤基因药物用途

公开(公告)号 CN1314811C  
公开(公告)日 2007.05.09  
申请(专利)号 CN200510042988.9  
申请日期 2005.07.25  
专利名称 重组嵌合分子Cb1-Grb7(SH2)-RING真核表达质粒及抗肿瘤基因药物用途  
主分类号 C12N15/79(2006.01)I  
分类号 C12N15/79(2006.01)I;C12N15/66(2006.01)I;A61K48/00(2006.01)I;A61P35/00(2006.01)I  
分案原申请号  
优先权  
申请(专利权)人 中国人民解放军第四军医大学  
发明(设计)人 李 霞;张 璟;刘新平;药立波  
地址 710032陕西省西安市长乐西路17号  
颁证日  
国际申请  
进入国家日期  
专利代理机构 西安通大专利代理有限责任公司  
代理人 李郑建  
国省代码 陕西;61  
主权项 重组嵌合分子Cbl-Grb7(SH2)-RING真核表达质粒的构建方法,其特征在于: 首先将BamH I和EcoR V引入Cbl N端编码基因SH2的两端,获得CblN(BamH I+EcoRV);将其克隆入pGEM-T easy载体进行测序,测序正确后利用KpnI/XhoI酶切,将酶切片段插入到pcDNA3.1(+)真核表达载体的KpnI/XhoI酶切位点之间,即得到pcDNA3.1(+)-CblN(BamH I+EcoR V); 再以SK-BR-3细胞的cDNA为模板,设计引物扩增得到Grb7 SH2基因,将该Grb7 SH2基因克隆到pGEM-T easy载体中,酶切鉴定及测序证实序列正确后,以BamH I和EcoR v双酶切将Grb7 SH2基因切出,插入到所述pcDNA3.1(+)-CblN(BamH I+EcoR V)载体的BamH I/EcoR V酶切位点之间; 经BamH I和EcoR v双酶切鉴定后,对获得预期大小的插入片段的载体再进行测序证实,命名为pcDNA3.1(+)-Cbl-Grb7(SH2)-RING,即为重组嵌合Cbl泛素连接酶Cbl-Grb7(SH2)-RING真核表达质粒。  
摘要 本发明公开了重组嵌合Cb1泛素连接酶Cb1-Grb7(SH2)-RING真核表达载体的构建方法,所构建表达质粒pcDNA3.1(+)-Cb1-Grb7(SH2)-RING能够作为抗EGFR或HER2阳性肿瘤的基因药物。经实验证明:重组嵌合分子Cb1-Grb7(SH2)-RING真核表达质粒转染EGFR阳性癌细胞A549或HER2阳性乳腺癌细胞系SK-BR-3后,通过促进EGFR或HER2下调,有效地抑制了与EGFR或HER2过度活化有关的细胞增殖,因而具有抗EGFR或HER2阳性肿瘤的用途。  
国际公布  
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