公开(公告)号
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CN1944456A
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公开(公告)日
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2007.04.11
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申请(专利)号
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CN200610096899.7
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申请日期
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2006.10.24
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专利名称
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一种苦荞麦抗肿瘤蛋白的制备方法
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主分类号
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C07K1/30(2006.01)I
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分类号
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C07K1/30(2006.01)I;C07K2/00(2006.01)I;A61K38/02(2006.01)I;A61P35/00(2006.01)I;A23J1/12(2006.01)I
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分案原申请号
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优先权
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申请(专利权)人
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江南大学
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发明(设计)人
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郭晓娜;姚惠源;张 晖;王 立
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地址
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214036江苏省无锡市惠河路170号
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颁证日
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国际申请
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进入国家日期
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专利代理机构
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无锡市大为专利商标事务所
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代理人
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时旭丹
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国省代码
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江苏;32
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主权项
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一种苦荞麦抗肿瘤蛋白的制备方法,其特征在于:以苦荞麦粉为原料,加缓冲液进行搅拌提取,离心分离,收集上清液,加硫酸铵分级沉淀,离心分离,收集沉淀,复溶,透析,冷冻干燥得到苦荞麦水溶性蛋白质TBWSP;TBWSP溶解于缓冲液中上DEAE-Sepharose FF离子交换层析柱,分离得到抗肿瘤活性组分TBWSP3;TBWSP3溶解于缓冲液中上Sephadex G-100凝胶过滤层析柱,得到抗肿瘤活性的有效组分TBWSP31,工艺为: (1)苦荞麦水溶性蛋白质TBWSP的制备:苦荞麦粉加入到pH7.2,10mmol/L磷酸盐缓冲液中,苦荞麦粉与缓冲液的质量/体积比为1∶10,室温下搅拌提取2h,然后4℃、10000转/分钟离心20分钟,收集上清液,上清液中加入固体硫酸铵,至饱和度为70%~90%,再搅拌20分钟,然后4℃、10000转/分钟离心20分钟,弃去上清液收集沉淀,沉淀加少量水复溶,然后将其装入透析袋中,置于4℃去离子水中透析48h,浓缩后冷冻干燥,制得TBWSP; (2)DEAE-Sepharose FF离子交换层析:苦荞麦水溶性蛋白冷冻干燥样品TBWSP溶解于pH7.2、10mmol/L磷酸盐缓冲液中,TBWSP的浓度为5~10mg/mL,3000转/分钟离心10分钟,取上清液加入到DEAE-Sepharose FF离子交换柱中,依次用pH7.2、10mmol/L磷酸盐缓冲液、含0.2mol/L NaCl的磷酸盐缓冲液和含0.5mol/L NaCl的磷酸盐缓冲液为洗脱剂进行洗脱,分别收集峰组分,用280nm紫外检测法逐管检测,命名为:TBWSP1、TBWSP2和TBWSP3,蒸馏水透析脱盐,冷冻干燥,分离得到抗肿瘤活性组分TBWSP3; (3)ephadex G-100凝胶过滤层析:TBWSP3溶解于pH7.2、10mmol/L磷酸盐缓冲液中,TBWSP3的浓度为10~15mg/mL,3000转/分钟离心10分钟,取上清液加入到ephadex G-100凝胶过滤柱中,然后用pH7.2、10mmol/L磷酸盐缓冲液进行洗脱,收集峰组分,用280nm紫外检测法逐管检测,命名为:TBWSP31、TBWSP32和TBWSP33,蒸馏水透析脱盐,冷冻干燥,纯化得到抗肿瘤活性组分TBWSP31。
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摘要
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一种苦荞麦抗肿瘤蛋白的制备方法,属于苦荞麦精深加工技术领域。本发明以苦荞麦粉为原料,采用硫酸铵分级沉淀、离子交换色谱和凝胶过滤色谱对苦荞麦水溶性蛋白质(TBWSP)中抗肿瘤活性组分进行筛选、分离及纯化,得到了具有抗肿瘤活性的有效组分TBWSP31。本发明方法设计科学合理,所得组分TBWSP31对人乳腺癌细胞株Bcap37的生长有显著的增殖抑制活性,IC50值为19.75μg/mL,为苦荞麦的综合利用和深度开发提供理论依据和应用价值。
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国际公布
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