| 公开(公告)号 | CN1944645A |
| 公开(公告)日 | 2007.04.11 |
| 申请(专利)号 | CN200610102042.1 |
| 申请日期 | 2006.10.17 |
| 专利名称 | 利用乳腺生物反应器制备重组人的抗凝血酶Ⅲ蛋白的方法 |
| 主分类号 | C12N15/09(2006.01)I |
| 分类号 | C12N15/09(2006.01)I;C12N15/85(2006.01)I;C12N15/12(2006.01)I;C12N5/06(2006.01)I;C12N15/06(2006.01)I;A61K38/17(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 青岛森淼生物技术研究所 |
| 发明(设计)人 | 袁三平;邹贤刚;鲜 建 |
| 地址 | 255068山东省青岛市株州路177号惠特工业园A区5号楼2层 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 青岛发思特专利商标代理有限公司 |
| 代理人 | 蔡绍强 |
| 国省代码 | 山东;37 |
| 主权项 | 一种利用乳腺生物反应器制备重组人的抗凝血酶III蛋白的方法，其特征是该方法包括下述步骤： (1)选用哺乳动物的乳蛋白基因为转基因的调控区和表达框架，在乳蛋白基因的表达框架上建立唯一的酶切位点和乳蛋白分泌序列，然后将重组人的抗凝血酶III蛋白基因和肠激酶蛋白质酶切序列连接在乳蛋白基因的表达框架上，转基因载体的末端再连接一个筛选基因； (2)所构建的载体经DNA序列分析，确定人的抗凝血酶III蛋白基因与乳蛋白基因的DNA序列，并与乳蛋白基因本身的表达和功能基因的氨基酸组成一致； (3)用电穿孔或脂质体诱导的方法，将人的抗凝血酶III蛋白基因表达载体，转入体外培养的动物的体细胞中； (4)在培养基中对细胞株进行筛选，获得筛选后的阳性细胞株；一部分细胞冷冻保存，一部分细胞用于制备DNA； (5)阳性细胞株的DNA，经PCR和Southern杂交分析，确定含有人的抗凝血酶III蛋白基因的细胞株； (6)转基因的细胞株的细胞移入山羊成熟的去核卵母细胞的卵周隙内，然后使供核细胞和去核卵母细胞融合； (7)将克隆胚胎移植到寄母羊的输卵管中，经妊娠获得转基因克隆羊； (8)检测转人的抗凝血酶III蛋白基因的转基因动物的乳汁中的重组人的抗凝血酶III蛋白含量； (9)含有人的抗凝血酶III蛋白的转基因动物的乳汁中的重组人的抗凝血酶III蛋白的提纯； (10)纯化的重组人的抗凝血酶III蛋白的动物试验； (11)重组人的抗凝血酶III蛋白在人体上的应用。 |
| 摘要 | 本发明涉及一种利用乳腺生物反应器制备重组人的抗凝血酶III蛋白的方法。其包括：选哺乳动物的乳蛋白基因为转基因的调控区和表达框架，在框架上建立一个唯一的酶切位点，再将人AT-III蛋白基因功能部分，乳蛋白分泌序列和肠激酶蛋白质酶切序列基因，连接在表达框架上，载体的末端再连接一个筛选基因；将表达载体转入体外培养的动物体细胞中；获得含有人的AT-III蛋白基因的细胞株；转基因细胞株移入山羊成熟的去核卵母细胞内，使供核细胞和去核卵母细胞融合；克隆胚胎移植到寄母羊的输卵管中，经妊娠获得转基因克隆羊；检测转基因动物乳汁中的人AT-III蛋白的含量和活性、提纯；经动物试验和人体试验；重组人AT-III蛋白在人体上的应用。 |
| 国际公布 |
