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您现在的位置: 医学全在线 >> 药学理论 >> 中国药品专利文献 >> 正文:利用乳腺生物反应器制备重组人的抗凝血酶Ⅲ蛋白的方法专利检索:专利号/专利人/发明人
    

利用乳腺生物反应器制备重组人的抗凝血酶Ⅲ蛋白的方法

公开(公告)号 CN1944645A  
公开(公告)日 2007.04.11  
申请(专利)号 CN200610102042.1  
申请日期 2006.10.17  
专利名称 利用乳腺生物反应器制备重组人的抗凝血酶Ⅲ蛋白的方法  
主分类号 C12N15/09(2006.01)I  
分类号 C12N15/09(2006.01)I;C12N15/85(2006.01)I;C12N15/12(2006.01)I;C12N5/06(2006.01)I;C12N15/06(2006.01)I;A61K38/17(2006.01)I  
分案原申请号  
优先权  
申请(专利权)人 青岛森淼生物技术研究所  
发明(设计)人 袁三平;邹贤刚;鲜 建  
地址 255068山东省青岛市株州路177号惠特工业园A区5号楼2层  
颁证日  
国际申请  
进入国家日期  
专利代理机构 青岛发思特专利商标代理有限公司  
代理人 蔡绍强  
国省代码 山东;37  
主权项 一种利用乳腺生物反应器制备重组人的抗凝血酶III蛋白的方法,其特征是该方法包括下述步骤: (1)选用哺乳动物的乳蛋白基因为转基因的调控区和表达框架,在乳蛋白基因的表达框架上建立唯一的酶切位点和乳蛋白分泌序列,然后将重组人的抗凝血酶III蛋白基因和肠激酶蛋白质酶切序列连接在乳蛋白基因的表达框架上,转基因载体的末端再连接一个筛选基因; (2)所构建的载体经DNA序列分析,确定人的抗凝血酶III蛋白基因与乳蛋白基因的DNA序列,并与乳蛋白基因本身的表达和功能基因的基酸组成一致; (3)用电穿孔或脂质体诱导的方法,将人的抗凝血酶III蛋白基因表达载体,转入体外培养的动物的体细胞中; (4)在培养基中对细胞株进行筛选,获得筛选后的阳性细胞株;一部分细胞冷冻保存,一部分细胞用于制备DNA; (5)阳性细胞株的DNA,经PCR和Southern杂交分析,确定含有人的抗凝血酶III蛋白基因的细胞株; (6)转基因的细胞株的细胞移入山羊成熟的去核卵母细胞的卵周隙内,然后使供核细胞和去核卵母细胞融合; (7)将克隆胚胎移植到寄母羊的输卵管中,经妊娠获得转基因克隆羊; (8)检测转人的抗凝血酶III蛋白基因的转基因动物的乳汁中的重组人的抗凝血酶III蛋白含量; (9)含有人的抗凝血酶III蛋白的转基因动物的乳汁中的重组人的抗凝血酶III蛋白的提纯; (10)纯化的重组人的抗凝血酶III蛋白的动物试验; (11)重组人的抗凝血酶III蛋白在人体上的应用。  
摘要 本发明涉及一种利用乳腺生物反应器制备重组人的抗凝血酶III蛋白的方法。其包括:选哺乳动物的乳蛋白基因为转基因的调控区和表达框架,在框架上建立一个唯一的酶切位点,再将人AT-III蛋白基因功能部分,乳蛋白分泌序列和肠激酶蛋白质酶切序列基因,连接在表达框架上,载体的末端再连接一个筛选基因;将表达载体转入体外培养的动物体细胞中;获得含有人的AT-III蛋白基因的细胞株;转基因细胞株移入山羊成熟的去核卵母细胞内,使供核细胞和去核卵母细胞融合;克隆胚胎移植到寄母羊的输卵管中,经妊娠获得转基因克隆羊;检测转基因动物乳汁中的人AT-III蛋白的含量和活性、提纯;经动物试验和人体试验;重组人AT-III蛋白在人体上的应用。  
国际公布  
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