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您现在的位置: 医学全在线 >> 药学理论 >> 中国药品专利文献 >> 正文:一种基因载体的制备方法及应用专利检索:专利号/专利人/发明人
    

一种基因载体的制备方法及应用

公开(公告)号 CN1306965C  
公开(公告)日 2007.03.28  
申请(专利)号 CN200410023347.4  
申请日期 2004.06.25  
专利名称 一种基因载体的制备方法及应用  
主分类号 A61K48/00(2006.01)I  
分类号 A61K48/00(2006.01)I  
分案原申请号  
优先权  
申请(专利权)人 中南大学  
发明(设计)人 周科朝;朱晒红;黄苏萍;李志友  
地址 410083湖南省长沙市左家垅  
颁证日  
国际申请  
进入国家日期  
专利代理机构 中南大学专利中心  
代理人 胡燕瑜  
国省代码 湖南;43  
主权项 一种基因载体的制备方法,其特征在于: (1)羟基磷灰石纳米颗粒制备: 将分析纯Ca(NO3)2和(NH4)H2PO4分别溶于去离子水中,配成1mol/L的溶液,将Ca(NO3)2和(NH4)H2PO4溶液以体积比5∶3的比例在1500转/min的转速下混合,并用NaOH调节溶液的pH值在11~12范围,搅拌10小时后,老化24小时;再将得到的沉淀物放入高压釜中,在200℃、200mv、200转/分钟的转速下处理4小时,再经清洗、过滤、干燥得到羟基磷灰石纳米颗粒; (2)羟基磷灰石纳米颗粒生物相容性实验: 将SGC-7901细胞接种于96孔组织培养板;加入不同浓度的纳米颗粒混悬液,继续培养48h后进行MTT测定,比色法确定有活力的细胞数,方差分析方法采用SPSS9.0统计软件进行; (3)羟基磷灰石纳米颗粒与DNA结合实验: 取琼脂糖粉制凝胶,将羟基磷灰石纳米颗粒混悬液稀释,加PEGFP-N1混均10min,静置30min,离心;以PEGFP-N11μg为对照,取上清液琼脂糖凝胶电泳检测;取羟基磷灰石纳米颗粒混悬液,并将其调至不同的pH值,分别放入eppendorf管与PEGFP-N1混合,混均,室温静置30min,离心;取上清液琼脂糖凝胶电泳检测; (4)纳米颗粒一DNA复合体体外转染细胞实验: 将SGC一7901细胞接种于培养皿加入配有小牛血清的DMEM培养基培养24h后,在培养皿加入纳米颗粒DNA复合体;以单纯PEGFP-N1表达质粒DNA以及与脂质体结合的PEGFP-N1表达质粒DNA作为对照;混合培养分别于24,48,72h后荧光显微镜下观察结果。  
摘要 本发明涉及医学领域用的材料,尤其是一种基因载体材料的制备方法,其特征在于:将Ca(NO3)2和(NH4)H2PO4溶液以体积比5∶3的比例在1500转/min的转速下混合,再将得到的沉淀物放入高压釜中,在200℃、200mv、200转/分钟的转速下处理4小时,得到羟基磷灰石纳米颗粒;它的结构与骨和牙齿相似,是具有良好生物相容性的生物陶瓷材料,可根据应用的要求制备成所需要的几何形态,具有大的表面能,增强其携带DNA的能力,解决了基因载体转导率低、药物易从脂质体中渗漏和难制备等问题,保证了在使用过程中的分散稳定性,满足了基因治病的有效性和安全性。  
国际公布  
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